核桃楸含药血清对体外培养肝癌细胞增殖的影响.pdfVIP

·128· V01．19No．2 中国中医药科技2012年3月第19卷第2期Mar．2012 核桃楸含药血清对体外培养肝癌细胞增殖的影响4 吴宜艳郑科文侯甲福 雷涛梁启超梁忆红 (牡丹江医学院·牡丹江157011) 表1 1实验材料1640培养液：Takara公司；四甲基偶氮唑盐：Simga公 核桃楸皮含药血清对SMMC一7721 司；二甲基亚砜：天津北方天医化学试剂厂；5一氟尿嘧啶(5一FU)： 细胞增殖的影响(：±s，n=6) 江苏恒瑞制药有限公司，批小牛血清：杭州四季青；胰 蛋白酶：GIBCO公司；核桃楸树皮：采集自牡丹江牡丹峰，经本院药 用生物研究室鉴定；SMMC一7721瘤株：牡丹江医学院抗肿瘤研究所 提供；超净工作台：上海博讯实业有限公司；C02恒温孵育箱：日本三 洋；酶标自动分析仪：美国MolecularDevices；微量震荡器：海门市其 林倍尔仪器厂；倒光学显微镜：JAPAN。 2方法 与同一时点掰性对照组比较+Pn05，}·P(也0l；()内为抑制率 2．1核桃楸树皮有效成分的提取精密称取核桃楸树皮样品 4讨论 5009，以乙醚回流至无色，剩余物以甲醇回流至无色，旋转蒸发仪回 mandshurica 核桃楸(Juglans Maxim)又名胡桃楸、山核桃、小核 收甲醇转水溶，过滤，浓缩，得样品液浓度0．181lmg／ml。 桃等，为胡桃科胡桃属落叶乔木。据记载其树皮、根皮、叶片、未成熟 2．2 药物制备及剂量按照序贯法测定实验动物半数致死量，根据 外果皮及外壳均可入药【l】。核桃楸树皮煎煮液I：1服治疗肿瘤在民 半数致死量设定高、中、低3个剂量，高剂量1．6rag／kg、中剂量 间被广为传说。在临床常作为复方制剂，其化学成分中的胡桃醌 0．78mg／kg、低剂量0．26mg／kg灌胃给药。 (juglone 2．3含药血清的制备健康小白鼠20只(牡丹江医学院动物房提分之一【3J。但其提取的其他活性部分临床研究报道较少。为此我 供，雌雄各半，体重209～229)。随机分成5组：阴性对照组、阳性对 们选用人肝癌细胞SMMC一7721作为研究对象，观察核桃楸树皮去 照组、核桃楸皮低剂量组、核桃楸皮中剂量组及核桃楸皮高剂量组。 脂提取物的抗肿瘤效应。中药复方多数是通过口服而发挥作用，使 给药前禁食lO～12小时，不禁水。各组小鼠于每日早、晚各灌胃给 用中药粗制剂直接加入离体反应体系中进行的实验研究，在方法学 J方法制备含药血清， 药1次，每次0．2ml／lOg，共2次。按文献【2 上存在很多问题，如中药中的杂质成分、各种电解质或鞣质的影响 56℃水浴中灭活30分钟，用0．22“m的微孔滤膜过滤除菌，置一 等，都会对实验结果造成一定的影响。中药血清药理学实现了体外 20℃保存备用。 实验和体内实验的较好结合，可以排除以上各种因素的影响，能较好 2．4细胞培养SMMC一7721细胞按常规培养在含有10％新生牛 的接近药物体内环境中产生药理效应的过程，目前是研究中药药理 血清和青霉素、链霉素双抗的培养液中。培养箱温度为37C，C02 学的一种较为理想的方法【4J。MTr显色法是近几年评价肿瘤细胞 为5％，相对湿度为98％。细胞单层贴壁生长，待长至80％左右备生存状态较受推崇的方法之一。当