检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立.pdfVIP

364 ·论著· 检测马白细胞介素·18双抗体夹心ELISA方法的建立 童铁钢，白 宇，张维军，王 群，刘光亮，徐树兰，吴东来母 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医牛物技术国家荸点实验审，黑龙江哈尔滨150001) interleu· [摘要] 目的：建立检测马白细胞介素．18(equine 为监测马机体免疫状态和研究马机体免疫机制提供 kin-18，EIL一18)的双抗体夹心ELISA，为马传染病的免疫学研 技术平台。 究提供新方法。方法：将识别不『司表位的ElL一18的2株单克 隆抗体(mAb)BIG1和$6A3纯化后，利用生物素标记试剂盒 1材料和方法 对B1G1株mAb进行标记，以重组马白细胞介素一18(rEIL? 1．1材料抗EIL-18 mAb杂交瘤细胞诱生腹水|4’、大肠杆 18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立ElL一18双抗体夹心 ELISA。结果：经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度 为4 000。建立的方法可检 mg／L，检测抗体的上作效价为1：2 测马血清中的Ell，18，与猪、牛和羊血清中的IL-18小发生交 叉性反应，此方法枪测敏感度达到15ns／L，特异性良好。 结论：成功建立了ElL．18的双抗体夹心ELISA，为马细胞免G proteinSpinchromatography 疫学研究提供r方法，也为下一步EIL一18ELISA试剂盒的商 nylation 品化Jf：发奠定了坚实基础。 [关键词]马白细胞介素一18；单克降抗体；夹心ELISA清由巾国农业科学院哈尔滨兽医研究所周建华研究员惠赠。 [中图分类号]R392．11[文献标识码]B 1．2方法 1．2．1mAb的纯化及生物素标记mAb腹水经辛酸-硫酸铵 Purification 白细胞介素一18(interleukin—l8，IL—18)具有广泛法【8J粗提后，利用Nab“Spin Kits做进一步纯化； mAb 的生物学活性，在介导细胞免疫、抵抗微生物感染和 用EZ—Link@Sulfo—NHS-LC—BiotinylationKits对抗EIL一18 进行生物素化，按照产品说明书上的方法进行生物素标记。 抗肿瘤方面起着重要的作用【11。IL—18在临床上可作 为免疫增强剂，在抗微生物或抗肿瘤制剂中得以应 1．2．2ELISA操作程序参照人和猪II。一18检测试剂盒中说 用。评价IL．18在机体内的动态变化水平指标，对了 解传染性疾病的发生、发展、转归情况及其机体保护 mL／L (洗涤液：0．5 性免疫反应动态规律有着重要的意义¨’2|。因此，建 液：含lOg／LBSA的洗涤液)；用洗涤液稀释捕获抗原rEIL一 立评价IL—18在机体中水平变化的检测方法显得十 18，100“L／孔，置225r／min速度的振荡器上振荡，常温孵育 分重要。检测IL—18在机体中水平变化的方法多为1．5h；洗涤3次，加封闭液稀释的检测抗体(生物素化B1G1 ELISA法。到目前为止，国内外已有人、小鼠、猴、