preMiD基因突变检测技术原理和应用.pdf

preMiD®基因突变检测技术原理和临床应用 简介 原癌基因和抑癌基因的驱动突变（driver mutation ）是肿瘤特有的标记。以PreGen-Plus™筛查大肠癌4 基因突变的粪便筛查被 FDA 批准为标志，更多突变检测肿瘤的新技术和产品处于临床开发阶段。为真自 主创新的preMiD®技术平台可一次检测49 个基因298 突变点，覆盖包括肺癌、肝癌、结直肠癌、胰腺癌、 乳腺癌和胃癌等 18 种肿瘤，同时在国际上第一次实现多突变的血浆检测。临床验证preMiD®技术可实现 癌症（超）早期，疑似患者的辅助诊断，以及术后复发的实时监控，总体准确率可达80%。 肿瘤突变检测原理 1. 突变——肿瘤特异标志 癌症是基因突变累积的结果。“所有癌症的发生，都源自脱氧核糖核酸（DNA ）序列的异常。”国际癌 症基因组联合计划参与单位之一、英国剑桥大学桑格研究所首席科学家斯特拉顿教授指出。 癌变的形成要经过8--10 年甚至更长，而这漫长的时间其实就是一个多基因突变并累积的过程（图1）。 肿瘤相关基因可分为原癌基因和抑癌基因，其中起主要作用的突变属于驱动型突变（driver mutation ）。当 抑癌基因突变失去抑制癌症作用，或原癌基因突变激活，就会诱发癌症。正常细胞在向癌细胞转化的过程 中，发生多种不同原癌基因和抑癌基因突变。 图1 肿瘤是基因突变的结果 相比临床检测中常规使用的肿瘤蛋白血清标志物，突变无疑是更特异的肿瘤标记。 2009 年 12 月，桑格研究所在《自然》杂志上刊文宣布，他们率先在世界上破译肺癌、皮肤癌和乳腺 癌等5 种肿瘤全部基因密码，绘制出相应的肿瘤基因突变图谱（表1）。 表1 5 种癌症基因突变相关数据 Zhengyan Kan, Bijay S. Jaiswal, Jeremy Stinson, et al. Nature. 2010. 466:869-873. 2. 循环DNA 是检测突变的重要来源 肿瘤起源DNA 存在于血液循环DNA 中。循环DNA 存在于血清或血浆、滑膜液和脑脊液等体液中的 非细胞里面存在的片段，亦称细胞游离DNA(cell-free DNA,cfDNA) 。 早在1947 年Mandel 和Metais 就发现循环核酸；30 年后Leon 等研究表明肿瘤患者外肿瘤患者cfDNA 水平大大高于正常人；1989 年Stroun 等发现血液游离DNA 具有肿瘤细胞DNA 的一些特征；5 年后研究 者在肿瘤患者的血浆和血清中检测到癌基因突变，与原发肿瘤一致。肿瘤细胞 cfDNA 如何进入血液，目 前认为：1) 循环肿瘤细胞或微转移灶的裂解；2) 肿瘤细胞的凋亡；3) 肿瘤细胞坏死；4) 肿瘤细胞自发性 释放。（图2 ） 图2 肿瘤cfDNA 来源示意图 cfDNA 突变检测具有特异、实时且无创等突出特点，无疑是肿瘤早期筛查、辅助诊断、预后判断及跟 踪复发等有效靶标。 肿瘤突变检测进展 1. 早期筛查 1) PreGen-Plus™大肠癌筛查 FDA 已批准PreGen-Plus™非侵入式结肠癌粪便4 基因突变筛查，主要检测APC 、KRAS 、P53 和BAT-26 等4 个基因突变（图3 ）。美国癌症协会（ACO ）和放射学会联合推荐检测该产品用于可疑人群的筛检，临 床证实可检出70%结肠癌（包括早期结肠癌），还可以检测超过37%的癌前病变。 图3 结肠癌发展过程中的基因变化 2) 肾癌筛查 福克斯·蔡斯癌症中心（Fox Chase Cancer Center) 的研究表明：尿检突变法在诊断肾癌方面具有较高精确 度，还可用于对患者手术后的状况进行监测。 50 名肾癌患者尿样的DNA 分析均有突变，与手术肿瘤组织中发现的基因突变相一致，未患癌症的健 康研究对象尿检无突变，符合率达 100%。30 名早期肾癌患者经尿检突变检出27 人，准确性达 90%。17 名手术后肾癌患者尿检结果显示，他们尿样中不再含有手术前曾发现的基因突变。 2. 术后复发监控 1）BEA