老外精华冰冻切片的制作技巧.doc

冰冻切片的制作技巧 [精华] 下面发一个有关冰冻切片制作的资料，来自于国外病理医生的经验和心得，现翻译过来供大家参考，欢迎提出不同的见解。冰冻切片技术1.从锋利的刀片开始我发现使用新的锋利的刀片时常常做出高质量的片子。我觉得在医疗场合中某些尽量省钱的做法显得有些因小失大。一般我对每位患者的标本都使用一组新的刀片，当片子的质量开始下降时，我会立刻更换刀片。某些组织如质地较硬的胶原和钙化组织会使刀片很快变钝，因此，经常更换刀片显得很有必要，有时候我在切片过程中要连续更换2-3次刀片。2.坐着还是站着我切片时总是坐在一张凳子上。要学会把刷子作为一种便捷的辅助工具来操作，从而精细地控制显微厚薄程度的片子。切片时俯身弯腰，颈部过伸的姿势有些不妥，要尽量处于放松和舒适的姿势以便能最大程度控制你的左手。3.刷子我是一位刷子的使用者。我相信要想切好片子首先学会使用刷子。刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到台子上。冷冻的片子会自发的卷缩并从刷子上脱离下来，因此，我使用一把有硬毛、夹取面宽的刷子。我发现来自中国的野猪毛十分坚硬，非常管用。你可以花3美元从工艺店买一把1/4英寸长的#2号扁平无色的刷子，把毛削成一个角度。由于是个有角的头端，加上握持刷子成一定的角度，这样刷子与组织接触时就会象扫帚一样的平。我不能理解为什么有人使用脆弱的骆驼毛刷子，组织片很容易从这些柔软的毛上掉下来。 4.握持刷子左手象拿笔一样握持刷子，将第五指轻压于台面上以稳定握笔的手(或根据手和切片机尺寸的大小置于你感觉合适的地方)，这样可以保证操作者动作的灵活及可控性。我把刷子削成一个角度，大致与左手握持刷子的角度相同，这样使刷子平着接触组织的1/4。 3.组织块的填涂——基本的修复填涂可以解决组织块自身的缺陷，下面我举几个具体的例子。扁平包埋组织的填涂包埋扁平的组织时，只有一层薄薄的包埋物贴附在底面，而且包埋物会轻微地收缩与组织块分离，如果想以最小的休整开始切片，那么收缩的空间必须填涂上包埋物，如果不填涂，切片时组织便会与包埋物分离，从而很难获得一张完整的片子。下面这个简单的技巧可以使你获得一个整齐的组织面。 针头的移除在工作中经常会收到布满针头的标本，有时候针头会穿过整个组织，导致刀片的损坏并使片子一分为二，下面有一种简单的解决办法。 缝线的移除同样的方法移除组织块中的缝合线 （缩略图，点击图片链接看原图） 学会看片子这里指的是片子滑过刀片时就要辨别出质量的好坏，如果到镜下才发现片子的缺陷那就无法挽救。1.观察片子的厚薄尽管冰冻切片机可以设置厚度，但人为辨别片子的厚度是否合适仍然很重要。片子太薄看起来象半透明的镜纸，片子太厚看起来混浊、柔性差，对我来说，5-6um的片子较合适，象一张薄的打印纸。2.片子破裂这种假象往往是组织块冷冻过度所致，可以通过升温来解决，含水量多的组织切片很容易破裂，必须升高到一个合适的温度使裂开程度降到最小。水肿或血液组织经常有这种问题，活检的脑组织也很明显。下面的片子来源于肾肿瘤，含水量丰富，破裂也比较明显，我觉得水性的肿瘤组织在常规温度下冷冻将会变得异常的坚硬。 我觉得组织破裂的过程同一块湿布结冰一样的道理，当你用刀去挑这块湿布时它会自然弯曲，当湿布已经结冰时刀会将冰片弄裂。下面有6张片子，上面的3张破裂很明显，底部的3张很轻微，你必须仔细看才能发现，如果在切片时你集中注意力，你能感觉到甚至听到碎裂的声音。 3.片子上的条纹垂直于刀片的细条纹为刀片缺口所致，这往往是切到钙化组织、针头或缝线的结果。 5.摇柄的旋转以连续均匀的力量转动切片机的摇柄，且要毫不犹豫。我看到很多冰冻切片者手握着刷子在开始切片时总要停一下，缓慢的抓取组织，然后再开始转动摇柄。依我的经验看来，这种动作增加了起始切片假象的可能，会使片子的厚度不均匀，也增加了处理脂肪类组织的难度。我切片时，象前面所说的那样手握刷子，以一种连续的动作抓取组织，这个动作与刀片接触组织同时开始并贯穿于整个过程。6.刷子的移动组织块移向刀片时刷子也要同步地向下移动，当组织块刚好接触刀片时刷子轻轻停在其底部2mm处并迅速抽离。正是刷子的向下移动使你能连续地抓取组织，当开始的几毫米组织穿过刀片时便有自发卷曲的现象，这时，运动中的刷子立刻粘住其游离的边缘部分并水平地拖向切片者。刷子的运动路径是一个朝下的“肘”形，然后再朝向你自己，连续不断。但要注意有时候把组织压向台面时会使组织粘在台面上，可能会导致碎片，应尽量避免。当然预先将组织包埋起来可以使刷子不用接触到组织，切片也容易多了。见以下视频：/space/file/qiannao/share/2009/10/20/video-00201.rar/.page 宽条纹，组织破碎或突然