一种酰基高丝氨酸内酯酶筛选方法的建立.pdfVIP

圃 2010．VoI．27No．8亿亏与生物互程 一种酰基高丝氨酸内酯酶筛选方法的建立 李婧，叶邦策 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237) 成30C6一HSL信号分子，解决了信号分子价格昂贵且不易保存的难题。在此基础上，建立了一种酰基高丝氨酸内酯酶 筛选方法，并对筛选体系进行优化，最终确定信号分子合成酶的诱导时间为6h、舍有信号分子的培养液的体积为50 耻L、CV026报告茵的过夜培养物的体积为20弘L。该方法可用于酰基高丝氨酸内酯酶的筛选，并且对不同酶活性的酰基 高丝氨酸内酯酶具有很好的区分度。 关键词：酰基高丝氨酸内酯酶；群体感应；AiiA；CV026；luxl；筛选 中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(2010)08一0070—04 许多细菌都能够合成并释放一种或多种被称为自 1 实验 诱导物的信号分子，胞外的信号分子浓度能随细菌菌 1．1菌株、质粒与试剂 体密度的增大而增大，细菌利用信号分子在细胞间的 vi— 扩散，来感知自身和周围环境中其它细菌的数量变 olaceum 026)报告菌由上海交通大学许煜泉教授、华 化[1]。当信号分子达到一定临界浓度时，就会启动菌 东理工大学阿华生物工程研究所张元兴教授惠赠，LB 体中相关基因的表达，调控菌体的某些生物行为，如生 培养基，Kan抗性，培养温度为28℃。该报告菌可以 物膜的形成I-2|、孢子的生成、荧光的产生、抗生素的生 指示30C6一HSL信号分子的存在并产生紫色色素。 物合成、毒性因子的产生、胞外多糖的合成、细菌丛集、 质粒结合转移、稳定生长期的进入等，以适应环境的变 (北京)有限公司，I。B培养基，培养温度为37℃。 化，这种现象被称为群体感应(Quorum sensing， QS)[3|。 为本实验室构建，其表达产物AiiA蛋白可以降解 近年来，人们逐渐从一些原核生物以及真核生物 中鉴定出了一些酰基高丝氨酸内酯酶，能够降解细菌 度为37℃。 的群体感应信号分子，干扰细菌的群体感应系统，并且 H- 破坏其参与调控的生物学功能[4]。更为重要的是，酰 Arnold教授惠赠。 基高丝氨酸内酯酶能够降解特定的决定动植物病原菌 DNA连接酶、Xho rTaqDNA聚合酶、T4 I限制 致病因子产生的群体感应信号分子，减轻或者消除病 性内切酶、EconI限制性内切酶、DNA 原菌的致病性。许多能够合成酰基高丝氨酸内酯酶的