反相高效液相色谱法分离制备蜂毒肽类似物.pdfVIP

第 卷 分析化学 （ ） 研究简报 第 期 30 FENXI HUAXUE 12 年 月 2002 12 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1459~ 1462 反相高效液相色谱法分离制备蜂毒肽类似物 ! 李顺子 阎虎生 何炳林 （南开大学高分子化学研究所，吸附与分离功能高分子材料国家重点实验室，天津 300071） 摘 要 应用高效制备液相色谱法，对 种合成的蜂毒肽类似物分离制备。当用极性较强的洗脱液做流动相 5 时，主峰的保留时间短，且主峰和前后的杂质峰不能很好的分开；随着洗脱液极性减弱至某一值时，主峰和杂 质峰的保留时间均向后延长，且时间间隔加大，可以成功地对多肽样品进行分离制备。用多肽分子中各氨基 酸保留常数加和值的方法可以预测不同多肽的保留时间，为选择分离纯化多肽所需的流动相提供了参考作 用。经半制备分离纯化后的产物用分析型RP-HPLC 测定达到了很高的纯度，氨基酸分析结果表明得到了所 需的肽段，可以用于下一步的研究工作。 关键词 高效制备液相色谱，蜂毒肽 1 引 言 ［，］ 1 2 反相高效液相层析（ ） 特别适用于质量不大的蛋白质和多肽物质的分离纯化。这是因 RP-HPLC 为：该法以水为基本组成部分，这与多肽的生物学性质很相宜，虽然流动相中的酸和有机溶剂，以及固定 相均可使肽的天然构象发生变化，但当这些因素除去后，肽的构象一般能恢复原状。因此在RP-HPLC 中，肽的活性回收率很高，一般在 以上；与通常的柱层析等分离方法相比， 具有速度快，灵 80% RP-HPLC 敏度高，分辨率强等优点，使之成为分离纯化生物样品的最有效方法之一，在生化领域起着重要的作用。 ［］ 蜂毒肽3 （ ）是一种含 个氨基酸残基的阳离子抗菌肽，它的强溶血作用抑制了它在临床上的使 melittin 26 ［］ ［］ 4 5 用 。研究表明：蜂毒肽的 端 肽类似物保留了抗菌等生物活性，而又没有溶血活性 。为了研究 C 15 蜂毒肽类似物的抗菌机理和筛选出高抗菌活性的肽段，采用固相多肽合成方法，合成了一系列蜂毒肽的 端 肽类似物。本文用高效制备液相色谱技术对合成的粗肽成功地进行了分离提纯，得到了高纯度 C 15 的多肽样品，为下一步的研究创造了条件。 2 实验部分 2 . 1 仪器 高效液相层析仪（美国 公司），配有 高效液相层析泵， TM 二极 Waters2010 Waters Waters 600 Waters 996 管阵列式紫外检测器和Millennium32 色谱工作站。 2 . 2 试剂 乙腈（色谱纯，南开大学精细化学实验厂）；高纯水（用石英高纯水亚沸蒸馏器蒸馏的二次水，再经 制备）；三氟醋酸（ ）（优级纯， 公司）。 Milli-O