葛根素对慢性脑缺血大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.pdfVIP

CA1区 Bcl一2和 Bax蛋 )4 蛋白表达的影响。方法：3月龄 sD大鼠64只，体重3004- 照组)、慢性脑缺血组(简称缺血组)和慢性脑缺血 +葛根 (BCAI)制作慢性脑缺血大鼠模型，免疫组化染色方法观 }马CA1区，相同时间点不同类亚组进行比较，治疗组bcl一 且Bax阳性细胞数明显低于缺血组 (P0．O1)但高于对照 宁组均高于缺血组 (P0．01)，缺血组低于对照组 (P ：葛根素能上调 Bcl-2蛋 白的表达、下调 Bax蛋 白的表达， 保护作用的机制之一。 _ 后，归笼饲养，保持昼夜节律，自由摄食饮水。其 l寓 治(5疗0m组g术k／前g)半小时每只大鼠腹腔注射葛根素注射l 。 以后治疗组大鼠每天每只注射葛 翟； 双素侧注射颈液总动50脉m外gk，手／g术。对过照程组同大缺血鼠组除不。结对扎照和组剪和II 1 材料与方法 1．3 组织切 片制备 1．1 实验动物分组 3O天组和 90天组大鼠分别在 30天和 9O天后 实验选用 3月龄 SD大鼠64只，体重 (300± 处死，经灌注、固定、开颅取脑后，切取包含海马部位 20)g。实验动物随机分成30天组和90天组，各组 的脑组织块行梯度酒精脱水，二 甲苯透 明，石蜡包 再分成假手术对照组 (简称对照组)、慢性脑缺血组 埋，行冠状位连续切片，片厚 5 m。 (简称缺血组)和慢性脑缺血+葛根素治疗组 (简称 1．4 免疫组化染色 治疗组)三个亚组 。其 中3O天对照组 8只，90天对 (1)制作免疫组化的玻片均需经过防脱处理 照组 8只，其余各个亚组均为 12只。 (预先涂上 Poly—L—Lysine(多聚赖氨酸)后，烤干)， 1．2 动物模型制作与给药 切片充分脱蜡至水。(2)PBS缓冲液冲洗 3次，每 慢性脑缺血大 鼠模型的制作参照 delaTorreJC 次 3分钟 (3X3分钟，下同)。(3)3％的过氧化氢 等 采用的双侧颈总动脉永久性结扎法 (BCAL)进 室温孵育 10分钟，消除内源性过氧化物酶活性。 行。大鼠以10％水合氯醛0．35mL／100g腹腔注射 (4)PBS冲洗3X3分钟。(5)滴加溶液A(蛋 白阻 麻醉，仰卧固定于手术台上，剪除长毛，碘伏消毒，行 断液)，室温孵育 l0分钟，减少非特异性背景染色。 颈前正中皮肤切 口，钝性分离暴露左侧颈总动脉，用 (注：孵育时间超过 15分钟会减弱染色效果)。(6) 1号手术丝线分别永久性结扎颈总动脉远端和近 滴加一抗 (Bcl一2为 1：100，Bax为 1：75)，37。C孵 端，并于两结扎点中间剪断颈总动脉，以同样方法结 育2h。(7)缓冲液洗 3X3分钟 。(8)滴加溶液 B 扎并剪断右侧颈总动脉，缝合皮肤切 口。手术过程