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AhR 和 NF-κB 在 pol κ转录调控中的作用 徐炀 潘锵荣 胡汛 浙江大学医学院附属二院肿瘤研究所，（310009） E-mail: pqrhz@ 摘要 :最近几年陆续出现了一批参与跨损伤合成的 DNA 聚合酶，称为特殊化 DNA 聚合酶 （specialized DNA polymerase），DNA聚合酶 kappa（pol κ）就是其中之一。有关 pol κ 在肿瘤中差异表达的机制还不清楚。通过本课题的研究，试图阐明 pol κ的转录调控机制， 有助于我们深入了解 pol κ在肿瘤发生发展中的作用。为了验证 AhR和 NF-κB这两条通路 在 pol κ转录调控中的作用，分别将这两个转录因子的激动剂和拮抗剂以不同时间和/或浓 度作用于细胞，采用半定量 RT-PCR 检测 pol κ水平的变化。PCR 产物电泳条带用凝胶分析 软件扫描，以 GAPDH 为内对照，比较每个样品的 OD 值。AhR 的激动剂 B(a)P 诱导 pol κ表 达，呈现时间-效应关系，如 10μM 作用 6 小时诱导 pol κ水平增加 1.5 倍，24 小时增加 2.5倍。AhR的拮抗剂，ANF抑制 pol κ表达，24小时使 pol k表达下调 3倍。NF-κB激动 剂，TPA（125nM）在 24小时能诱导增加 2倍，TNF（1ng/ml）对 pol κ表达没有影响。NF- κB的拮抗剂，TPCK和 PDTC都能抑制pol κ的表达，pol κ约下调 2倍。这些结果初步证 实了 AhR 和 NF-κB 在 pol κ的转录调控中起重要的作用。 关键词：DNA 聚合酶 kappa；核因子κB；芳香烃受体 1 1.引言 有关pol κ在肿瘤中差异表达的调控机制还不清楚。生物信息学分析显示调控区上有增 强子XRE和κB，而且NF-κB激动剂TPA能上调启动子活性。结合日本学者的研究结果，他们 发现小鼠pol κ转录受芳香烃受体AhR调控，用AhR的诱导剂甲基胆蒽 （3-methylcholanthrene, 3-MC）能增加小鼠睾丸中pol κ的表达水平[1]。我们推测，AhR 和NF-κB在人pol κ基因的转录调控中发挥重要作用。本实验采用AhR和NF-κB的诱导剂和 抑制剂来作用人肿瘤细胞系，用RT－PCR的方法检测pol κ的表达水平，初步验证polκ转录 调控机制。 2. 材料和方法 2.1 细胞系：人宫颈癌细胞 Hela，人肺癌细胞 D6 均来自浙江大学肿瘤研究所。 2.2 主要试剂 2.2.1 化学试剂：苯并芘（Benzo(a)pyrene, B(a)P），α-萘甲黄酮 (α-naphthoflavone, ANF)，二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolinine dithiocarbamate, PDTC），N-甲苯磺酰 L-苯 丙氨酸氯甲烷酮（N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone，TPCK），乙酰豆寇佛波 酯（12-O- tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA）均是 Sigma 公司产品；肿瘤坏死因子 （Tumor Necrosis Factor α, TNFα）是中科院上海生物工程研究所产品；二甲基亚砜 （Dimethyl Sulfoxide, DMSO）上海化学试剂厂产品。 2.2.2 DMEM 培养基（高糖型）：DMEM粉末（GibcoBRL）1 袋，加碳酸氢钠 2.8g，葡萄糖 3.5g， 加超纯水 800ml，搅拌溶解，调节 PH值至 7.0，加水定容至 1000ml。在超净台内用 0.22μm 的微孔滤膜抽滤除菌，分装，4℃保存。临用前加小牛血清至终浓度 10％，青霉素 100 U/ml， 链霉素 100 μg/ml。 2.2.3 RPMI 1640 培养基：RPMI-1640 粉末（GibcoBRL）1 袋，碳酸氢钠 2.0g，超纯水 800ml 磁力搅拌溶解，调