新的人内源性逆转录病毒NP9基因的分子克隆和病毒蛋白表达.pdfVIP

第 34 卷　第 4 期 浙 江 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) V o l 34　N o 4 ( ) 2005 年 JOU RNAL O F ZH EJ IAN G UN IV ERS IT Y M ED ICAL SC IEN CES 2005 : ∥ . . . . h ttp www journals zju edu cn m ed 新的人内源性逆转录病毒N P 9 基因的 分子克隆与病毒蛋白表达 1 2 1 任跃忠 , 戴巧定 , 徐荣臻 ( 1. 浙江大学医学院 附属第二医院, 浙江 杭州 310009; 2. 浙江省中医院, 浙江 杭州 310006) [ 摘　要]　 目的: 研究新近发现的人内源性逆转录病毒N P 9 基因与自身免疫性疾病的相关性及其可能的作用机 制, 构建该基因的蛋白表达系统。方法: 提取自身免疫性疾病患者外周血单个核细胞(PBM C s) 的总RNA , 利用R T 技术, 扩增 9 基因, 然后将该片段进行 克隆并测序鉴定, 纯化回收后亚克隆于原核表达载体 30 PCR N P T A pQ E 中, 然后提取质粒, 酶切鉴定; 最后经 诱导, 原核表达重组子在 15 宿主菌进行表达, 并进行 与 IPT G M SD S PA GE 印迹分析与鉴定。结果: 应用 技术, 从系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的总 中扩增 W estern R T PCR RNA 到一条大小约为 250 的片段, 经 克隆与测序鉴定, 证实此片段为 9 基因, 具有一个完整的开放阅读框 bp T A N P 架; 将 30 9 重组子转化入宿主菌, 用 诱导菌体表达 9 重组蛋白, 经 电泳和 印 pQ E N P IPT G N P SD S PA GE W estern 迹技术鉴定