HPLC_ICP_MS联用技术在富硒金针菇硒的形态分析中的应用.pdf

Vo l. 28 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 4 2 0 0 7 年 4 月 　　　　　CHEM ICAL JOURNAL OF CH IN ESE UN IV ER SITIES　　　　　 　 635 ～639 　 HPLC ICPM S联用技术在富硒金针菇硒的 形态分析中的应用 1 2 1 1 1 3 1 铁 　梅 , 方禹之 , 孙铁彪 , 李 　闯 , 费金岩 , 李华为 , 臧树良 ( 1. 辽宁大学环境科学系 , 沈阳 110036; 2. 华东师范大学化学系 , 上海 200062; 3. 沈阳师范大学化学与生命科学学院 , 沈阳 110034) 摘要 　从富硒培养的金针菇中分离得到含硒化合物 , 并采用 SEHPLCICPM S联机技术对浸提液中的含硒化 合物进行分离分析 ; 同时对样品中的硒蛋白在特定条件下水解 , 采用 RPHPLCICPM S联机技术对水解液中 硒代氨基酸进行确认 , 并测定其中硒的含量. 结果表明 , 可溶态硒是富硒金针菇中硒的主要存在形式 , 其中 小分子含硒有机化合物中的含硒量占浸提液中硒的 7187% ; 而含硒蛋白所占比例为 488% ; 进一步确定富 硒金针菇中含有硒代胱氨酸 、硒代蛋氨酸和由二者组成的含硒多肽等 , 各形态硒的含量为总硒量的 12 3% , 176%和 368%. 本方法将具有高效分离能力的色谱技术与高灵敏度的元素检测技术成功结合 , 用于含硒 生物分子中硒的在线分析 , 具有快速 、灵敏及准确等特点. 关键词 　金针菇 ; 形态分析 ; 硒 ; HPLCICPM S 中图分类号 　O657. 63　　　　文献标识码 　A 　　　　文章编号 (2007) ( ) 硒为人和动物体内必需的微量元素. 研究发现 , 硒以硒代半胱氨酸 SeCys或 Sec 残基形式参与 到相应蛋白质中发挥生物活性作用 [ 1～3 ] . 由于硒代半胱氨酸的插入 , 这些蛋白质常常是由特异密码子 , ( ) 即作为终止密码子之一的 U GA 编码的 , 因此现在普遍认为硒代半胱氨酸 Sec 是生物体中用于蛋白质 合成的第 2 1种氨基酸 , 且在这些蛋白质中常常参与构成酶的活性中心 , 是人体内最强的抗氧化酶 ——— ( ) [ 4 ] 谷胱甘肽过氧化酶 GSH Px 的重要组成部分 ; 硒可以硒代蛋氨酸形式直接参入到蛋白质中而贮存 于机体内, 并可通过正常的代谢可逆性地释放出来 , 但人体无法 自行合成硒代蛋氨酸 , 因此 , 硒代蛋 氨酸全部来自于外源供应 [ 5 ] . 硒还能与多糖和核酸结合 , 形成含硒多糖及含硒核酸 , 与硒蛋白一起构 成了生物体内主要的含硒生物大分子物质并发挥着生理生化作用. 然而硒在生物体中的含量很低 , 欲 将其中以不同化学形态赋存的硒进一步分离 、测定并作明确鉴定是十分困难的[ 6 ] . ( ) 用高效液相色谱法 H PLC 可对生物分子进行有效分离 , 具有分离效能、灵敏度高 , 速度快等优 点[ 7 ] . 对于含硒生物小