中国药典维生素A测定法—科标检测.doc

中国药典维生素A测定法 ——科标检测 科标检测可以提供专业维生素检测服务，可以根据客户的不同类型和检测需求，严格按照相关标准和方法进行检测，积累了大量的实践经验和科学数据，以下介绍的是《中国药典》中维生素A测定方法。 本法用紫外-可见分光光度法或高效液相色谱法测定维生素 A 及其制剂中维生素 A 的含量，以单位表示，每单位相当于全反式维生素 A醋酸酯 0.344μg 或全反式维生素 A醇 0.300μg。 测定应在暗室中进行。 一、紫外-可见分光光度法 由于维生素 A 制剂中含有稀释用油和维生素 A 原料药中混有其他杂质，采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素 A 独有的吸收。在以下规定的条件下，非维生素 A 物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正，以便得到正确结果。 校正公式采用三点法，除其中一点是在吸收峰波长处测得外，其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定，因此仪器波长应准确，故在测定前，应对仪器波长进行校正。 检查法 取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每 1ml中含 9～15单位的溶液，照紫外－可见分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸光度与波长 328nm 处吸光度的比值和波长328nm处的 E1％1cm值。 如果吸收峰波长在 326～329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02，可用下式计算含量： 每 1g 供试品中含有的维生素 A的单位＝E1％1cm（328nm）×1900 如果吸收峰波长在326～329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量： A328（校正）＝3.52（2A328－A316－A340） 如果在 328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0％，则不用校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果校正吸光度与未校正吸光度相差在－15％至－3％之间，则以校正吸光度计算含量。 如果校正吸光度超出未校正吸光度的－15％至－3％的范围，或者吸收峰波长不在 326～329nm 之间，则供试品须按下述方法测定。 另精密称取供试品适量（约相当于维生素 A 总量 500 单位以上，重量不多于2g） ，置皂化瓶中，加乙醇 30ml 与 50％（g/g）氢氧化钾溶液 3ml，置水浴中煮沸回流 30 分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水 10ml 冲洗冷凝管内部管壁，将皂化液移至分液漏斗中 （分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂） ， 皂化瓶用水 60～100ml分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取 4 次，每次振摇约 5 分钟，第一次 60ml，以后各次 40ml，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约 100ml，洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚酞指示液不再显红色，乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器过滤，滤器用乙醚洗涤，洗液与乙醚液合并，置250ml量瓶中，用乙醚稀释置刻度，摇匀；精密量取适量，置蒸发皿内，微温挥去乙醚，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每 1ml 中含维生素 A9～15 单位，照紫外－可见分光光度法，在 300nm、310nm、325nm 与 334nm四个波长处测定吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在 323～327nm之间，且 300nm 波长处的吸光度与 325nm 波长处的吸光度的比值应不超过 0.73，按下式计算校正吸光度： A325（校正）＝6.815A325－2.555A310－4.260A334 每 1g 供试品中含有的维生素 A的单位＝E1％1cm（325nm，校正）×1830 如果校正吸光度在未校正吸光度的97％～103％，则仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果吸收峰的波长不在 323～327nm 之间，或 300nm 波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值超过 0.73，则应自上述皂化后的乙醚提取液250ml中， 另精密量取适量 （相当于维生素 A300～400 单位） ， 微温挥去乙醚至约剩 5ml，再在氮气流下吹干，立即精密加入甲醇 3ml，溶解后，精密量取 500μl，注入维生素 D测定法 第二法项下的净化用色谱柱系统，准确收集含有维 3生素 A 的流出液，在氮气流下吹干，而后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解”起，依法操作并计算含量。 二、高效液相色谱法 本法适用于维生素 A醋酸酯原料及其制剂中维生素 A的含量测定。 检查法 色谱条件与系统适用性试验 用硅胶