保健食品中淫羊藿苷的测定.doc

保健食品中淫羊藿苷的测定 1 范围 本标准规定了保健食品中淫羊藿昔的测定方法。 本标准适用于以淫羊藿苷为主要原料的保健食品中淫羊藿苷的测定。 本标准检出限：当取样量1.0g，定容至50mL，进样量10μL时，检出限为4×10-4 g/100 g定量限为1.2×10-3 g/100 g ，本标准的线性范围：2μg/mL~125μg/mL。 2 原理 淫羊蕾昔为淡黄色针状结晶，根据其易溶于水、乙醇、乙酸乙酯、不溶于醚、笨、三氯甲烷的理化特性。试样中的淫羊藿苷用70%乙醇在超声波振荡下提取，定容，离心后取上清液过滤膜，经C18反相柱分离，在紫外检测器270nm波长处检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 3 试剂和材料 3. 1甲醇(CH3OH)：优级纯。 3. 2无水乙醇（C2H5OH）：分析纯。 3. 3石油醚（CnH2n-2）：分析纯，沸程60℃－90℃。 3. 4 水（H2O）：为实验室一级用水，电导率（25℃）为0.01mS/m。 3. 5聚酰胺粉：60目-80目。 3. 6 淫羊藿苷对照品（C33H40O15）：纯度≥98.0％。 3. 7淫羊藿苷对照品储备液（2.0mg/mL）：准确称取0.02g淫羊藿苷对照品（精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至10mL，混匀（淫羊藿苷对照品储备液存放于2℃－10℃冰箱中，有效期90d）。 3. 8 淫羊藿苷对照品使用液（0.2mg/mL）：准确吸取1.0mL淫羊藿苷对照品储备液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀（淫羊藿苷对照品使用液存放于2℃－10℃冰箱中，有效期90d）。 4 仪器和设备 4. 1 高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4. 2 超声波清洗器。 4. 3离心机：4000 r/min。 4. 4层析柱：内径1.5 cm，长15cm。 5分析步骤 5. 1试样处理 5.1.1以单一淫羊藿为原料的试样:取研磨均匀的试样1. 0 g~4.0 g(精确至0.001 g)，加人70%乙醇30 mL，超声提取20 min，过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50 mL,混匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤后进样。 5.1.2含油试样:取混合均匀的试样1. 0 g~4. 0 g(精确至0.001 g)，置于离心管中，加人30 mL石油醚，振摇1 min,4 000 r/min离心5 min后，弃石油醚层，重复此步骤三次。在沸水浴中将残渣中溶剂挥干后，按5. 1. 1向残渣中自“加人70%乙醇30 mL”起操作。 5.1.3淫羊蕾为主要原料的试样:取研磨均匀的试样1. 0 g~4. 0 g(精确至0.001 g)，加人70%乙醇30 mL，超声提取20 min，过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50 mL,混匀，过滤。精密吸取滤液25 mL置于蒸发皿中，沸水浴上蒸干。蒸发皿中残渣用5 mL水溶解，上聚酰胺柱(60目一80目，5g，内径1.5 cm，干法上柱)，以1 mL/min的流速，用水50 mL淋洗，弃去淋洗液，用乙醇100 mL洗脱，收集洗脱液，沸水浴蒸干。残渣用少量70%乙醇溶解并移至5 mL容量瓶中，再用70%乙醇多次洗涤并移人容量瓶，最后用70%乙醇定容至刻度，混匀，经0. 45μm微孔滤膜过滤后进样。 5.1.4液体试样:取试样1 mL~4 mL，加人70%乙醇30 mL，超声提取20 min，过滤。用少量70%乙醇洗涤残渣，收集滤液，并定容至50 mL,混匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤后进样。 5. 2标准曲线的制备 将淫羊蕾昔对照品使用液用甲醇稀释为2.0μg/mL、5.0μg/mL、25.0μg/mL、75.0μg/mL、125.0μg/mL的标准溶液系列。 5. 3液相色谱参考条件 5. 3. 1色谱柱：ODS C18柱，4.6 mm×250 mm ，5μm。 5. 3. 2检测器：检测波长270 nm。 5. 3. 3流动相：甲醇+水=65+35。 5. 3. 4进样量：10μL 。 5.3.5流速：1. 0 mL/min。 5.3.6色谱分析：取标准溶液系列及试样溶液注人色谱中，以保留时间定性，以试样峰面积或峰高与标准比较定量。 6 结果计算 试样中淫羊蕾昔的含量按式(1)进行计算： c× V×F X=————————— ……………………（1） m×1 000 式中： X—试样中淫羊蕾昔的含量，单位为克每千克或克每升(g/kg或g/L)； c—由标准曲线求得进样液中淫羊蕾昔的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL) ； V—试样定容体积，单位为毫升(mL) ； F—试样的稀释倍数； m—试样的质量(或体积)，单位为克或毫升(g或mL) 。 计