应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖链种属特异性.pdfVIP

24 中国医药生物技术 2011 年 2 月第 6 卷第 1 期 Chin Med Biotechnol, February 2011, Vol. 6, No. 1 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.01.006 ·论著· 应用凝集素芯片检测细胞膜表面 糖链种属特异性 马汝海，王天骄，潘忠诚，何群 【摘要】 细胞膜表面糖复合物在构建复杂的多细胞器 目的 应用凝集素芯片检测小鼠和兔不同组织细胞膜表面 官和生物体中担任特别重要的角色，参与细胞之间 的糖链类型，探求不同物种间相同组织细胞膜表面糖复合物 以及细胞与其基质之间的相互作用，这些相互作用 在种群免疫和细胞功能中的作用。 是多细胞生物发育和生物功能的关键环节[1] 。 方法 选择 22 种凝集素，利用生物芯片点样仪制备芯片， 多细胞的个体发育和各种类型细胞的活化与 选用牛血清白蛋白（BSA ）为阴性质控，马铃薯凝集素（STL ） 聚糖结构改变有着密切联系，基于这一方面已经有 为阳性质控。分别用胶原酶 I 、II 、IV 消化小鼠和兔的肾、 大量文献报道。人们已经意识到在哺乳动物胚胎发 脾、肝组织，制备细胞悬液，并加入吖啶橙荧光标记细胞。 育以及细胞活化过程中会发生细胞表面的糖基化 将细胞悬液分别滴加至凝集素芯片中，利用凝集素与糖链的 改变，认为糖基化可参与细胞黏附、受体活化、细 特异亲和性捕获细胞，激光扫描仪检测芯片中各凝集素位点 胞分化以及组织形态发生。但是关于在不同的相关 的荧光信号强度，行常规 HE 染色后于荧光显微镜下观察 物种中，相同糖蛋白是否具有相同类型的糖基化、 各凝集素位点所捕获的细胞形态，并分析不同胶原酶消化对 相同的组织细胞膜是否具有相同类型的糖链这方 检测结果的影响。 面报道尚不多。 结果 小鼠和兔相同组织的细胞膜表面糖链类型基本相同， 凝集素（lectin ）是一类糖结合蛋白，能专一地 仅个别位点略有不同。在 GNA 、LTL 、HHL 、NPL 位点， 识别单糖或寡糖中特定的糖基序列并与之结合，常 兔脾细胞均为阴性，小鼠脾细胞均为阳性。在 BPL 、WFA 位 用于寡糖和糖复合物的分离纯化和糖链的结构分 点，兔肾细胞均为阴性，小鼠肾细胞均为阳性；在 MAL-I 位 析[2] 。在本研究中，我们用构建的凝集素芯片分别 点，兔肾细胞为阳性，小鼠肾细胞为阴性。MPL 、WBA 、 对小鼠和兔的细胞膜表面糖链类型进行了检测，提 LTL 、SBA、BPL 、WFA 、MAL-I 、AAL 、BCL 位点，兔肝 取相同组织细胞并进行荧光标记，利用凝集素与糖 细胞均为阳性，小鼠肝细胞均为阴性；在 NPL 位点，小鼠 链的亲和性捕获细胞，激光扫描仪扫描检测捕获细 肝细胞为阳性，兔肝细胞为阴性。DSL 、STL 位点，小鼠 胞的凝集素位点，根据捕获得到的细胞膜表面糖链 和兔各组织细胞检测结果均为阳性；在 EEL 、DBA 位点， 与凝集素特异亲和性的不同确定不同组织细胞膜 小鼠和兔各组织细胞检测结果均为阴性。在 GNA 位点，兔 的糖链类型[3] ，以探求不同物种间相同组织细胞膜 脾组织经胶原酶 II 消化后可见极少量细胞，经其他 2 种胶 的糖链特异性。 原酶消化后则未见捕获细胞。兔肾组织以及小鼠的脾和肾组 织经 3 种胶原酶消化后，检测结果无明显差异。在 BCL 位 1 材料与方法 点，兔肝组织经胶原酶 IV 消化后捕获细胞最多，其次为胶 1.1 材料 原酶 II ，胶原酶 I 最少。 1.1.1 实验动物 雄性健康 C57 小鼠，均为 6 周龄，体重 20 ~