绵羊卵巢组织研究论文初稿.docVIP

2014届毕业生毕业论文 绵羊卵巢组织研究 学 名 努日艾合麦提·塔西 学 号 2011109124 所属学院 动物科学学院 专 业 动物医学 班 级 动医民14-1 指导教师 郑毛亮 塔里木大学教务处绵 羊 卵 巢 组 织 研 究 （努日艾合免提·塔西） (塔里木大学843300) 【摘要]为观察绵羊正常卵巢组织的形态结构，采用苏术精一伊红(hcmatoxylirrcosin, HE)染色法制作绵羊卵巢组织石蜡切片。结果显示，在切片制作过程中存在的问题主要包括染色不均、染色对比不明显、过度染色、染色过浅和切片出现斑点等。在试验过程中可通过充分分化、蓝化、充分水洗等因素的控制来提高切片的染色效果，该方法可为动物卵巢及卵泡染色切片制作提供技术指导。 关键词:绵羊；HF染色；卵巢；切片；优化； HF染色法是石蜡切片技术中常用的染色法。苏术精碱性染液可使细胞核内染色质与胞质内核糖体着蓝紫色;伊红酸性染料可使细胞质和细胞外基质中的成分着红色，作为组织学、月王胎学、病理学教学与科研中最基木的技术方法而被广泛使用[1]。 木试验通过HF染色技术制作石蜡切片，该方法是一种多步骤、多因素决定的过程，在试验中由于操作不当，经验不足，以及实践的使用和时间的掌握等诸多因素影响，出现切片脱落、染色不均匀、糊不清、褶皱，及细胞核和细胞质对比不明显等现象，从而影响使用效果。HF染色切片制作过程中出现的问题进行了探究，并提出解决方案，这对相关的试验操作具有指导意义。 1材料与方法 1. 1试验材料 木试验选用成年健康母羊，屠宰后取卵巢。 1.2主要试剂和仪器 Bouin氏固定液、包埋纸盒、染色缸、融蜡箱、切片机、恒温箱、载玻片、小烧杯、吸水纸、移液枪、盖玻片、石蜡，1%盐酸水溶液、0.5%伊红(水溶性)溶液、各梯度的乙醇、二甲苯、苏术精染液、伊红染液、中性树胶、蒸馏水。 1. 3试验方法 1. 3. 1绵羊卵巢的处理:将卵巢投入预先配好的固定液中(10%福尔马林Bouin氏固定液等)，使组织蛋白质变性并防止几细胞死亡后自溶或细菌分解。 1.3.2脱水透明:用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织中的水分，再将组织块置于二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块中的酒精，才能浸蜡包埋。 1. 3. 3浸蜡包埋:将透明处理的组织块置于熔化的石蜡中，放入熔蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋。 1. 3.4通切片与贴片:将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成厚度为5~8um薄片。切卜的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放朽。45℃恒温箱中烘干[2]。 1. 3.5脱蜡染色:染色前，用二甲苯（Ⅰ）脱蜡5min，入二甲苯(Ⅱ)中脱蜡 10min，用吸水纸吸干液体;入100%乙醇（Ⅰ）5min，入100%乙醇（Ⅰ） 5min，用吸水纸吸干液体;入95%乙醇3 min并过流水2 min，用吸水纸吸干水分。苏术精染色4~8 min，并用1%盐酸水溶液分化5~10s，自来水洗返蓝15~30 min;0. 5%伊红(水溶性)染色30 s,95%乙醇（Ⅰ）脱水5 min，用吸水纸吸干液体;95%乙醇(Ⅱ)脱水5 min，用吸水纸吸干液体;入100%乙醇（Ⅰ）5min,100%乙醇(Ⅱ) 2 min,用吸水纸吸干液体；入二甲苯（Ⅰ）中透明2~3min，二甲苯(Ⅱ)中透明5 min。用移液枪吸取适量中性树胶于载玻片上，盖上盖玻片待凝固后观察结果。 2结果与分析 2. 1正常染色 经显微镜观察，正常HF染色切片见图1-A,l-B。图1-A可见卵巢上有腔卵泡的存在，图1-B可见卵巢卵泡颗粒细胞(GC）、内膜细胞（TC)的细胞核呈蓝紫色;而周围的细胞质、纤维被染成粉红色，切片染色均匀无褶皱，细胞核和细胞质对比明显。 2.2染色异常 在切片制作尤其是染色过程中常会出现染色异常情况，从而影响了正常的组织形态观察。图1-C显示细胞核染色苍白、暗淡，细胞核与细胞质染色对比度差。出现这类问题有三种原因:切片在苏术精染液停留时间太短;苏术精染液过度氧化，失去染色能力;分化步骤处理时间过长。可进行切片重新染色。如果组织在酸性固定液Zenker,Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏术精染色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。 图1 - D显示细胞核过染，核膜、核仁等不清晰，细胞质含有大量的苏术精，导致细胞核与