双特异性磷酸酶1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响.pdfVIP

解放军医学院学报 Acad J Chin PLA Med Sch Apr 2015，36（4） 379 双特异性磷酸酶-1 过表达对肾癌细胞株A498 增殖和侵袭的影响 巩会杰，牛少曦，李世超，沈东来，顾良友，李新涛，高　宇，张　瑜，马　鑫，姚远新，张　旭 解放军总医院 泌尿外科，北京　100853 摘要 ：目的 构建携带人双特异性磷酸酶 -1(dual specificity phosphatase-1，DUSP-1) 基因的过表达慢病毒载体并包装病 毒，感染人肾癌细胞株 A498 后观察 DUSP-1 的过表达对肾癌细胞株 A498 增殖和侵袭能力的影响。方法 从 pCMV6-XL5- DUSP-1 质粒上获得目的基因片段，采用 DNA 重组技术将 DUSP-1 基因插入到慢病毒表达载体质粒 Plv-EGFP(2A)Puro 中， 获得重组 plv-EGFP(2A)Puro-DUSP-1 载体。重组慢病毒表达质粒及辅助包装质粒 pH1、pH2 共转染 293T 细胞进行慢病毒 包装，收集病毒上清并感染肾癌细胞株 A498，利用 Western blot 检测细胞 DUSP-1 蛋白的表达情况。用 MTS 法检测细胞 增殖能力的变化，Transwell 法检测细胞侵袭能力的变化。结果 成功构建携带 DUSP-1 过表达载体。包装病毒后成功感染 A498 细胞株，DUSP-1 蛋白表达较对照 A498 细胞株显著上调。重组质粒组细胞在 490 nm 吸光值明显上升 (P ＜ 0.05) ；细 胞侵袭试验中，重组质粒组的穿膜细胞数明显高于空载体组 (P ＜ 0.05)。结论 成功构建了人 DUSP-1 基因的重组慢病毒表 达载体 pLV-EGFP(2A)Puro-DUSP-1，进行病毒包装后成功培养稳定高表达 DUSP-1 基因的肾癌细胞株 ；DUSP-1 基因的过 表达具有促进肾癌细胞株 A498 增殖和侵袭的作用。 关键词 ：双特异性磷酸酶 -1 ；肾癌细胞株 A498 ；基因表达调控，肿瘤 中图分类号：R 737.11　文献标志码：A　文章编号：2095-5227(2015)04-0379-04　DOI ：10.3969/j.issn.2095-5227.2015.04.021 网络出版时间：2014-12-29 10:53　　　 网络出版地址 ：/kcms/detail/11.3275.R1053.001.html Effect of DUSP-1 overexpression on proliferation and invasion of renal cell carcinoma cell line A 498 GONG Huij ie, NIU Shaoxi, LI Shichao, SHEN Donglai, GU Liangyou, LI Xintao, GAO Yu, ZHANG Yu, MA Xin, YAO Yuanxin, ZHANG Xu Department of Urology, Chinese PLA General Hospital, Beij ing 100853, China Corresponding author: ZHANG Xu. Email: xzhang @ Abstract: Objective To construct the pLV-EGFP (2A) Puro-DUSP-1 lentiviral expression vector and package virus and observe the effect of DUSP-1 overexpression on proliferation and invasion of human renal cell carcinoma cell line A498. Methods The target gene obtained from pCMV6-XL5-DUSP-1 was cloned into Plv-EGFP (2A) Puro vector by recombinant DNA technology . The recombinant lentiviral vector pLV-EGFP (2A) Puro-DUSP- 1 was co-transfected into 293T cells with packaging plasmids p