基于PCR的CYP2C9基因多态性测定方法概述.pdfVIP

51—1356／R 936 WESrCⅢNAMEDICALJ0切RNAI．2007，V01．22，No．4CN [文章编号]1002—0179(2007)04—0936—02 吴逢波综述 陈泽莲，唐尧+ 审校 (四川大学华西医院药剂科，四川成都610041) [文献标志码]D [中图分类号]Q3l；R319 所测样本的基因型。 片段长度多态PCR测定CYP2C9基因多态性， 细胞色素P4502C9(CYP2C9)是CYP2C 亚家族的主要成员之一，约占人类肝细胞微 应用非常广泛。但是分析过程较费时，需昂 6变性高效液相色谱PCR 贵的内切酶，且许多限制性内切酶具有星号 变性高效液相色谱PCR是最近几年才发 粒体P450酶系的20％。CYP2C9参与人体内 多种药物的代谢过程，如华法林、甲苯磺丁 效应。 展起来的一项基因突变检测技术。变性高效 脲、格列吡嗪、塞来考昔、氟伐地汀等…。 3单链构象多态性PCR 液相色谱突变检测原理是依据DNA同源双链 大量研究表明，CYP2C9在人体内药物代谢中 单链构象多态性PCR的原理是将经扩增 和杂合双链从色谱柱上的洗脱时间不一进行 呈现出遗传多态性，不同的等位基因编码不 的DNA片段经过变性处理，形成单链，由于 分离。纯合突变产物与野生型PCR产物的变 同的酶，对底物表现出不同的亲和力和不同 序列不同，单链构象就有差异，在中性聚丙 性高效液相色谱图峰型相似，不易被识别鉴 ·的催化活性，并在前致癌物、前毒物和致突 烯酰胺凝胶中电泳的迁移率不同，通过与标 定，只有杂合双链DNA分子，才能被灵敏地 准物的对比，即可检测出有无突变。 检出。变性高效液相色谱分析样品是未经纯 变剂的活化中也起一定作用t21。CYP2C9作为 一种重要的CYP450酶成为当前研究的热点， 单链构象多态性PCR分析CYP2C9多态化的PCR扩增产物，杂合突变样品可直接用 性的基本程序为：①PCR扩增特定靶序列， 于分析，含纯合突变的样品需与野生型样品 其中研究最多的是CYP2C9*1、CYP2C9*2、 然后将扩增产物变性为单链；②进行非变性 等量混合，以形成杂合双链进行测定。 CYP2C9*3，其他还有CYV2C9*4～CYP2C9 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳时DNA单链的迁 丁晖等[10]利用变性高效液相色谱技术测 *13等，对CYP2C9多态性的测定是研究的 移率除与DNA链的长短有关外，更主要的是 定CYF2C9的亚型，过程是：①设计引物， 重要内容，特别是基于PCR的CYP2C9多态 性测定方法的研究。由于此类测定方法的准 取决于DNA单链所形成的构象不同，电泳迁 PCR扩增特定靶序列；②仪器检测PCR产 确性和及时性等有差异，本文从原理、优缺 移率也不同。PCR产物变性后，单链产物经 生，用变性高效液相色谱法判定基因型。 中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，靶DNA中含单碱 变性高效液相色谱PCR具有灵敏、特 点等方面综述了基于PCR的多种CYP2C9多 态性测定方法。 基置换，或数个碱基插入或缺失等改变时， 异、快速、高通量、低成本等优点。但是这 l逆转录PCR 因迁移率变化会出现泳动变位，从而可将变 种高灵敏性往往受到许多因素的干扰，比如， 逆转录PCR是被广泛应用的基因测定方 异DNA与正常DNA区分开。