普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关基因PvCaM1的克隆及表达.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2012，38(4)：606—613 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2012．00606 普通菜豆镰孢菌枯萎病抗病相关基因PvCaM1的克隆及表达 薛仁风 朱振东 王晓鸣 王兰芬 武小菲 王述 民 中国农业科学院作物科学研究所 ／农作物基因资源与基 因改 良国家重大科学工程， E京 100081 摘 要：钙调素蛋 白(calmodulin，CaM)作为植物细胞内介导多种功能的 ca结合蛋 白，在调节植物的生长发育和抗 病性方面具有重要作用。利用普通菜豆(PhaseolusvulgarisL．)表达序列标签(EST)克隆了含有编码普通菜豆 CaM基因 的cDNA序列。序列分析表明，eDNA片段长713bp，命名为PvCaM1，具有一个 453bp的开放 阅读框 (ORF)，GenBank 登录号为 JN418801，该基因编码 150个氨基酸，预测蛋 白质分子质量为 17．16kD。蛋白质结构分析表明，PvCaM1蛋 白含有4个 ca结合结构域(EF．hand)。同源分析结果显示，PvCaM1基因与百脉根 、西瓜的 CaM基因亲缘关系最近， 分别达到 77％和 76％。荧光定量 PCR分析表明，PvCaM1基因受尖镰孢菌菜豆专化型 FOP—DM01菌株诱导表达，接 种病原菌 96h，抗病品种 260205根中PvCaM1基因的表达量达到最高，而感病品种 BRB一130达到最低，260205叶中 PvCaM1基因的表达量均高于 BRB一130，而且叶中的表达量高于根和茎中的表达量 。PvCaM1基因表达量也受外源植 物激素脱落酸 、茉莉酸甲酯和乙烯利诱导上调，在根 、茎 、叶中均有不 同程度的表达 。本研究表明，PvCaM1基因可 能通过脱落酸、茉莉酸和乙烯等信号途径参与菜豆对 FOP．DM01菌株的防御反应，推测菜豆PvCaM1基因与镰孢菌 枯萎病 的抗病性有一定关联。 关键词：普通菜豆；镰孢菌枯萎病；PvCaM1基因；基因表达分析 Cloningand Expression AnalysisofFusarium W iltResistance—Related Gene PvCaM1inCommonBean(PhaseolusvulgarisL．) XUE Ren—Feng，ZHU Zhen-Dong，W ANG Xiao—Ming，W ANG Lan-Fen，W U Xiao—Fei，and W ANG Shu—M in InstituteofCropSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences／NationalKeyFacilityforCropGeneResourcesandGeneticImprovement， Beijing100081China Abstract：Calmodulin(CAM)isamultifunctionalCaZ+-bindingproteininplantcells．Itplaysimportantrolesinregulatingthe growth．developmentnaddiseaseresistanceinplants．A fu11一lengthcDNA sequencecodingforCAM incommonbeanwascloned basedonexpressedsequencetagsfrom commonbena ．Sequencenaalysisshowedhtattheisolatedrfagmentwas7】3bp，itcon— tainedna openreadingrfamef0RF1of453bpencoding150aminoacidswithahteoreticalmolecularweightof17．16kD，desig— natedPvCnMl(GenBank accessionnumber N418801)，OnlineScanPrositetoolanalysisshowed thatPvCaM1hadfoLlr Ca2+_bindingdomainswiht thefunctionofcombiningwithrfeeC