高效液相色谱实验室良好规范(GLP).pdfVIP

维普资讯 ， 、 ；依利特之页； k + + + + + 一+ 一+ 一 高效液相色谱实验室 的良好规范 (GLP) 1 溶剂的准备 正确准备溶剂对于高效液相色谱 (HPLC)试验是非常重要的，它能有效地避免鬼峰 、降低基线噪声 ，从而提高分析能力。 1．1 溶剂质量 HPLC试验均应使用 高纯度 的溶剂 ，HPLC级纯 度的溶剂 比分析级 (AR)溶 剂的纯度更 高，所 以稍 贵一些。但 是使 用 HPLC级溶剂一般不会产生鬼峰，而使用 AR级溶剂可能会 由于杂质的存在导致出现鬼峰。 要保证配制流动相用水的纯度足够高。因为去离子水通常含一些有机化合物 ，因此不推荐用于HPLC分析。常用的超纯 水 (18Mn ·cm)是去离子水通过离子交换处理得到 ，现代的水净化装置可 以大量生产这种纯水 ，HPLC级纯水也 可以从溶剂 经销商处购买 。 注意 ：不要把 HPLC纯水放在塑料瓶中，因为塑料中的添加剂可能会进入到水 中造成污染 最好用玻璃瓶储存超纯水 1．2 缓冲溶液 缓冲溶液的储存应有一定的时问限制，药典或相关 资料对此都有要求。所有 的缓冲溶液都应现用现配，以确保 会 为 缓冲溶液储存时间过长而使流动相 pH发生变化，同时也可避免生长微生物 pH 的变化和微生物 的生 长都 有可能影 响色谱 分离 的效果 。 商品缓 冲溶 液中可能包含硫代硫酸钠等稳定剂 ，这些稳定剂的存在可能会影响缓冲溶液的光学和色谱性能，因此 ，比较 理想的是购买不含稳定剂的溶剂。注意 ：重复使用的容器很容易被污染 ，因此推荐用小容量容器装溶剂 1．3 过滤 理想情况下，所有溶剂都要通过 0．45 m 滤膜过滤后再使用，这样能够有效防止 由于微粒存在导致流路管线堵塞 、过滤 后应把溶剂放在密封容器 中，以防止被重新污染。过滤后的溶剂既可用于色谱分析 ，也可用于清洗诸如泵头 、柱塞朴 、单向 和密封圈等仪器部件 ，最大程度地清洗好这些部件能保证系统性能 良好 。 1．4 脱气 在流动相进入 HPLC系统之前应首先脱气 。没有脱气的流动相进入到高压系统产生的气泡会 导致 系统不稳 、出现鬼峰等 问题 。从溶液中排除气泡的方法主要有 ：氦气脱气 、超声波脱气和真空脱 气。氦气或其他低溶解度气体足脱 气的有效 方法 ； 在线连续脱气可 以防止空气重新溶解在溶剂 中。 注意 ：确保溶剂瓶上有孑L，与大气相通 ，以防止溶剂瓶 内部产生负压 2 溶剂的使用 2．1 仪器 所有流路上都应装过滤器 ，以防止微粒进入系统。仪器不使用时 ，应把过滤器浸 入到 50％ 乙腈水溶液中，以防止微生物 的生长和污染物进入到过滤器 中。 流路管线应清洁通畅 ，且不存在硬性弯 曲部分。 储液瓶应尽可能与仪器处于相 同高度 ，且应高于泵的入 口。流路管线应长度合适 ，保证在线过滤器达到储液瓶底部。 注意 ：在做分析试验之前 ，应计算好总共需要多少流动相 ，以便配制足够的流动相并装在合适的容器 中。流动相不足会 造成系统抽干并充满空气。如果该类情况发生，需要用新配制的流动相重新冲洗系统并使基线平稳 。 2．2 流动相特性 除非 HPLC系统和色谱柱能够耐受，一般不要使用强酸或强碱溶液。因为 pH过商或过低可能会损 害密封 圈和柱塞杆。 如有疑 问，使用之前最好与色谱柱或仪器经销商联系 ，了解清楚相关事项。 水含量较高的流动相中容易生长微生物 ，因此这类流动相比纯有机溶剂流动相更易 出现问题。同时还应注意使用水含 量较高的流动相时色谱柱使用方面的限制，因为传统的烷基键合固定相在流动相 中有机溶剂的含量低于 5％以下时容 易发生 碳链断裂 。一些新型键合固定相可 以在 以纯水为流动相的条件下使用。 为 了避免使用含水流动相时系统中可能生成微生物 ，建议每隔48h左右用纯有机溶剂冲洗 HPLC系统和色谱柱，以清除 所生长 的微生物 。此外 ，加入少量叠氮钠也是抑制纯水相 中微生物生长 的有效方法 ，但是要注意它 的剧毒性 。 注意 ：不要长时间 (例如整个假期 )将色谱柱和 HPLC系统充满水或缓冲液 ，要经常用至少含 20％的有机溶剂冲洗系统。 大连依利特分析仪器有 限公 司 张庆 合 ，李 彤 编译