人表皮干细胞的体外分离培养和鉴定.pdfVIP

维普资讯 一 1272 一 重庆医科大学学报2007年第32卷第12期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2007．Vo1．32NO．12} 论 著 文章编号：0253一．3626(2007)12-一1272-一04 人表皮干细胞的体外分离培养和鉴定 李 丹，李世荣，曹 川 (第三军医大学西南医院整形外科，重庆 400038) 摘【 要】目的：探讨人表皮干细胞的体外快速分离培养及鉴定方法。方法：中性蛋白酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮 组织中分离表皮层和真皮层，并获得表皮单细胞悬液，采用Ⅳ型胶原铺板选择性黏附、分离和角质细胞无血清培养基 (K-．-SFM) 培养表皮干细胞。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况，检测细胞克隆形成率，免疫组化染色观察表皮干细胞标志物 B1整 合素和角蛋白19(KI9)的表达；以角质形成细胞作为对照。结果：组织学观察显示 ，培养24h后细胞呈克隆状生长；所分离、培养 细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞；免疫组化染色显示 ，培养细胞 B1整合素及 K19均呈阳性表达。结论：运用Ⅳ型胶 原黏附结合K—SFM培养可以实现人表皮干细胞的体外快速分离和培养。 【关键词】表皮干细胞；细胞培养；细胞分离；鉴定 【中国图书分类法分类号】Q813．1+1 【文献标识码 】A 【收稿日期】2007-05—12 Isolation。culture and identification Ofhmnan epitheliaIlstem cells LIDan，etal (DepartmentofBurnsandPlastic，SouthwestHospital，the rdll~litaryMedical University) A【bstract】Objective：Toexplor~amethodforisolationandcultureofhumna epidermalstemcells．Methods：TheEpidermal stem cellwereisolatedby adheringtocollagentypeIV afterobtainedbydigestinghumna foreskinwithDispase IInad Tryp nad cuhureinvitroin KSFM．TheexpressionsofB1-integrinnadkeratin 19 (K19)inepidermal stem cellweredetected with immunceytcehemical method s，nad hte colony fomr ing efficiency was also studied ．Keratinceyteswere served also detected． Resu／ts：It Was revealed by histological observation htat colonieswere fomr ed 24 hours after inoculation．Th e isolated na d cuhuredcellcloningefficiencyWas higherhtna htatof thecontrolgroup．Positiveexpressionof311-integrinnadK19ofcultured cellsWas detceted by immunceytcehemistry．Conclusion：Aduh epidemr al stem cellscould be successfully isolated nad cultured byadhensionwiht type1V collagennadcuhurewiht K--SFM K【eywords】Epidemralstemcells；Cellculture；Cellisolation；Identification 皮肤作为人体最大的器官，外层的表皮终生不