凝胶电泳分析蛋白酶活性的技术改进.pdfVIP

植物学通报 　2002 , 19 (5) :607～610 Chinese Bulletin of Botany 凝胶电泳分析蛋白酶活性的技术改进① 姜微波 ( 中国农业大学食品学院　北京 　100094) 摘要 　蛋白酶在植物生长代谢过程中具有重要的生理作用 。本文探讨了利用“凝胶电泳技术”分析蛋白 酶活性的改进方法 ,通过改变电泳分离胶中底物蛋白浓度估算了“目标蛋白酶”分子量 ;通过改变电泳前 的样品处理条件了解蛋白酶的部分特性 ;采用分离胶切割法了解“目标蛋白酶”的最适反应温度范围、最 适反应 p H 范围及蛋白酶的类型等 。并对影响凝胶电泳蛋白酶活性检测结果的各种因素作了分析 。 关键词 　蛋白降解 ,凝胶电泳 ,蛋白酶 Improvement in Assay of Protease Activity by Gel Electrophoresis J IAN G Wei-Bo ( School of f ood science , China Agricultural University , Beij ing 100094) Abstract 　Protease plays an important role in various processes of plant development . In order to i dentify specific proteolytic activities , gel electrophoresis was employed for protease activity assay . Some improvements was accomplished for estimating the molecular weight of the pursued protease , determining the optimal temperature and p H for protease activity in gel . The relevant factors , which may affect assay of protease activity , were analyzed in details. Key words 　Protein degradation , Gel electrophoresis , Protease 早期许多有关植物组织中蛋白水解酶活性变化的研究 ,仅局限于测定样品总体的蛋 ( ) 白水解活性或蛋白质降解速率 Lipton , 1987 ; Huffaker , 1990 ; Lalonde and Dhindsan ,1990 。 所获得的实验结果是多种蛋白酶的综合反应 ,而缺乏对不同蛋白水解酶特性的了解 。近 ( 几年有一些研究中利用“凝胶 电泳技术”分析蛋 白酶活性的方法 Stephenson and Rubin stein ,1998 ; Jiang et al , 1999) 可直接在电泳凝胶片上分析分子量不同的蛋白酶活性 ,为深 入研究蛋白酶的特性开辟了新途径 。但是 , 目前在“凝胶电泳分析蛋白酶活性的技术”方 面缺乏系统而详细的研究报道 。本研究中对“凝胶电泳分析蛋白酶活性技术”方法进行了 改进 ,并综合分析了各种相关因子对这种检测方法效果的影响 。 1 　材料和方法 11 　材料与样品蛋白提取 ( ) ( ) 试验分析材料包括欧芹 Petroselinum crisp um