华支睾吸虫胞囊蚴生物学作用的实验观察.docVIP

华支睾吸虫胞囊蚴生物学作用的实验观察 证实华支睾吸虫胞囊蚴是否具有无性生殖生物学作用。方法 在非流行区捕获麦穗鱼，经10尾检查证实为阴性后，作为实验用鱼；华支睾吸虫尾蚴由中山大学中山医学院寄生虫学教研室提供。分A、B组作尾蚴定量感染，两次实验相隔30d。A组将30尾麦穗鱼放在容积为50cm×30cm×40cm的玻璃鱼缸内，11d 内先后放入282条尾蚴感染麦穗鱼；B组用34尾麦穗鱼，分别将每尾鱼单独放在盛有300ml水的玻杯中， 各放入30条尾蚴感染麦穗鱼；感染后的麦穗鱼均在阳台上饲养待查。同时采用直接压片和捣碎水洗沉淀法检查囊蚴。结果 A组实验感染麦穗鱼30尾，丢失1尾，其余29尾感染率为100.00%；共检出囊蚴587个，是感染尾蚴数282条的2.08倍。B组实验感染麦穗鱼34尾，丢失3尾，其余31尾感染率为77.42%；共检出囊蚴1 024个，其中有1尾麦穗鱼检出囊蚴968个，是感染尾蚴数30条的32.27倍。A、B组检出囊蚴数的G值分别为5.84、2.53。感染率与感染度，其间差异有统计学意义（P ＜0.01、0.05）。探讨发生无性生殖的方式，认为有两种即：“囊蚴内繁殖”和“囊蚴外繁殖”；无性生殖种原来源于囊蚴内具有生物活性的游离颗粒。结论 初步证实华支睾吸虫在第二中间宿主麦穗鱼体内，有第二次无性生殖过程，胞囊蚴具有无性生殖的生物学作用。 　　华支睾吸虫在自然界完成生活史的过程中，宿主间转换传播动力比，终末宿主和第一中间宿主的变化规律基本保持一致，而第二中间宿主在转换寄生过程中，传播动力不仅未减弱还成倍增加[1]。形成这一生物学规律的原因，目前认为与第一中间宿主无性生殖作用尾蚴数量多有关。近年研究发现麦穗鱼体内有胞囊蚴的存在[2]，如果能够证实华支睾吸虫胞囊蚴，具有无性生殖的生物学作用，诠释这一现象更贴切。据此，2009-08 以来，作者进行了麦穗鱼定量感染华支睾吸虫尾蚴的实验观察，发现在麦穗鱼体内有第二次无性生殖过程，现将观察结果报告于后。 1　材料与方法　 1.1　华支睾吸虫尾蚴与阴性麦穗鱼来源　华支睾吸虫尾蚴由中山大学中山医学院寄生虫学教研室华支睾吸虫生活史实验室提供[3]。麦穗鱼采自华支睾吸虫病非流行区的重庆市涪陵区镇安镇庄子村五社一水塘，并经10尾麦穗鱼捣碎水洗沉淀法检查，证实该水塘的麦穗鱼为华支睾吸虫囊蚴感染阴性鱼，作为此次实验观察感染用麦穗鱼。 1.2　实验分组与尾蚴感染方法　实验观察分A、B组作尾蚴定量感染，两次实验相隔30d。①整群麦穗鱼定量尾蚴感染组（A组），将30尾麦穗鱼放在容积为50cm×30cm×40cm有水草生长的玻璃鱼缸内静养7d，然后于2009-08-17/28 期间，先后在解剖镜下分批计数282条尾蚴放入鱼缸内，让其自然感染麦穗鱼。该组计算感染日龄起始时间为2009-08-28 。②单尾麦穗鱼定量尾蚴感染组（B组），实验用麦穗鱼于2009-09-17 送达广州，当天开始感染尾蚴。分别将每一尾麦穗鱼放在盛有300ml水的玻杯中，于17、18日在解剖镜下计数30条尾蚴放入各玻杯中感染麦穗鱼。为防止麦穗鱼跳出，玻杯上盖有带孔的盖子。尾蚴放入玻杯9h后，将被感染的麦穗鱼取出放在塑料桶内集中饲养。该组计算感染日龄起始时间为2009-09-18 。实验结束3d后将A、B组感染的麦穗鱼带回涪陵，分组分别放入65cm×35cm×40cm容器内，在阳台上饲养待查。 1.3　麦穗鱼感染囊蚴检查方法与图片采集　对每一尾麦穗鱼先将鱼肉直接压片在10×10生物显微镜下检查；然后收集直接压片检查过的鱼肉，与鱼头、鱼肠内容物一起捣碎水洗沉淀，保留适量沉渣，分次在4×10生物显微镜下检查。分别记录两种检查方法检出的华支睾吸虫囊蚴数，以某一方法检出最多的囊蚴数，为该尾麦穗鱼检出的囊蚴数。 依据鱼鳞片上鱼龄线结合鱼体大小，确认为2009年当年生的麦穗鱼；早于2009年出生的麦穗鱼视为非当年生麦穗鱼。对A组、B组感染囊蚴数低于10个、30个的麦穗鱼，计算尾蚴感染成功率；感染囊蚴数高于10个、30个的麦穗鱼，视为发生无性生殖的麦穗鱼。囊蚴活动度下降，囊壁界线不整齐，排泄囊颜色特深颗粒粗大视为衰老囊蚴；囊蚴无活动，排泄囊散乱颜色变淡，视为死亡囊蚴。 采用重庆光学仪器厂生产的XST－1型三筒生物显微镜对麦穗鱼进行检查。在显微镜正上方的镜筒口，装上广州市明美科技有限公司生产的130万像素MD－10显微摄像头，与计算机连接摄制囊蚴照片保存备用。 1.4　统计分析　采用SPSS 12.0统计分析软件，对组间囊蚴感染率比较，计算Pearson 值；组间麦穗鱼华支睾吸虫囊蚴感染度，计算G值并作t检验分析。 2　结果 2.1　麦穗鱼感染率与感染度　此次实验观察的2组麦穗鱼，先后于2009-12-14/2010-05-14 完