微载体-基质细胞造血模型中小鼠骨髓细胞c-kit基因的表达.pdfVIP

天津医药2001年10月第29卷第10期 实验研究 微载体一基质细胞造血模型中 小鼠骨髓细胞c—kit基因的表达+ 张海玲张永富张君奎 足丽 q 摘要目的：检测小鼠原始造血细胞ekit基因表达以洋价体外模拟骨髓造血微环境。方法：建立傲载体基质 细胞体外造血模型。根据已发表的小鼠c．kil基因序列没计引物，采用R17PCR方法检测c—kiLmRNA水平，并测定 祖细胞集落产率。结果：小鼠骨髓造血细胞2周培养实验显示，粒系一巨噬系造血祖细胞集落产率(CFU．GM／105)： 模型组比液体悬浮培养和单纯微载体基质细胞培养对照组集落产率之总和高2．1倍(t=2869，P0．05)；原始造 05)。结论：在没 血细胞的c-kit基因表达水平(OD比率)：模型组比两个对照组之总和高3．1倍(￡=2．858，P0 mRNA 有外加细胞因子的条件下．微载体一基质细胞造血模型町抑制造血干、祖细胞过度分化与耗竭，维持其c—kit 较高的表达水平。 关键词骨髓细胞基因 聚合酶链反应 100 骨髓以及造血于、祖细胞移植是重建造血与免 u／ml青霉紊，100mg／L链霉素，37℃，饱和湿度．5％ 疫功能治疗某些严重血液病和恶性肿瘤的有效途径 O。2温箱中培养2～3周，换液时反复弃除不粘附细胞。待 微载体表面贴附基质细胞(Snwlalcdls．Str)后，可再次接 之一，也是基因治疗可供选择的方案之一。但是可 供移植的造血细胞来源非常有限，为了获得这些细 种BALB／c小鼠股骨骨髓(BM)单个核细胞8×106／瓶。用 50一方瓶，每瓶20一培养液，单个核细胞浓度为4×105／ 胞，人们寄希望于造血干、祖细胞体外扩增和大规模 111l，为G1组。设置单纯微载体一基质细胞(G2组)和单纯骨 培养。现在的组合细胞因子配方的液体悬浮细胞培 髓细胞(63组)培养作对照。接种前的骨髓细胞和徽载体一 养体系，不能阻止造血于、祖细胞的迅速分化与耗 基质细胞标本取样为GO组和GS组。培养l周后换培养液 蝎“12]。为了解决这个问题．我们利用l、xter培养 时分别离心沉降回收细胞．加同量新鲜培养液继续培养。培 体系”】，将细胞工程技术引用于体外造血细胞培养 养2周后分别取样，检测各项指标。取样标本中的微载体用 领域。采用微载体与基质细胞模拟骨髓造血微环 等渗的0．25％胰酶消化，稀释后在离心管中自然沉降5分 境，在不加细胞因子的条件下，观察微载体与基质细 钟去除微载体。上层细胞悬液经洗涤离心沉降，收获细胞， 胞造血模型对维持造血细胞自我更新的潜能，以及 同分组标本中的悬浮细胞混合，计数单个棱细胞供检测用。 抑制分化的效果。 1．2小鼠粒细胞、巨噬细胞集落形成单位(CFU。GM)测定 采用24孔培养板，每孔0．5ml甲基纤维紊培养体系。其 配方为IMDM，含有9