微量热法研究单底物酶促反应的热力学和动力学性质及过渡态的分析.pdfVIP

SINICA 化学学报 ACTACHIMICA1998，56，625--630 微量热法研究单底物酶促反应的热力学和 动力学性质及过渡态的分析 望天志+ 李卫萍一 刘 义 万洪文一 吴鼎泉 屈松生 (武汉大学化学系武汉430072) (一华中师范大学化学系武汉430070) 摘要用LKB一2107型微量热系统，测定了漆酶催化氧化3，4一二羟基苯甲醛、邻甲氧基酚、邻苯 三酚、3，4，5一三羟基苯甲酸反应的热谱图，利用热谱图计算了米氏常数(K。)、反应速率常数(愚2) 和热力学参数(△，H。，△Go，△GT≠，E。，△sT≠)．并应用过渡态理论对其催化过程进行了分析．结果 表明：稳定过渡态结构有利于酶促反应，酶一底物在反应物时相互作用仅仅是降低酶的催化效率． 提出两种可能提高酶催化效率的方法．由活化熵(AST)0得出酶一底物在过渡态的结构较酶一 底物复合物的结构更为有序． 关键词漆树漆酶，微量热法，动力学，热力学，过渡态 微量热法是热化学研究中的重要手段之一，它曾对热化学的发展起过重要作用，近年来， 它在细胞生物学．生物化学等方面得到了广泛的应用．已经证明[1-4J，微量热法可以用于酶促 反应的研究． 漆酶是一种重要的含铜氧化酶，能与邻、对二酚、胺类底物反应【5J，其活性中心是4个紧密 相连的铜原子，根据其光学性质的差异，可将铜原子分为三类，一个I型铜，一个Ⅱ型铜和两个 紧密相连的Ⅲ型铜．近几十年来，主要研究漆酶的结构，催化氧化机理及活性中心铜的作 用【6’7J．然而，很少有研究其热、动力学性质及利用过渡态理论分析其催化氧化过程的报道．本 文用微量热法研究漆酶催化氧化3，4一二羟基苯甲醛、邻甲氧基酚、邻苯三酚、3，4，5一三羟基 底物中，我们选择了一种单酚和三种不同取代基的二酚类化合物，以寻求漆酶催化氧化单酚、 二酚以及不同取代基二酚类底物的热、动力学性质的差异．在不同的温度条件下，测定了漆酶 催化氧化3，4，5一三羟基苯甲酸反应的热、动力参数，指出温度对漆酶催化氧化3，4，5一三羟 基苯甲酸热、动力学参数的影响．首次应用过渡态理论，从能量变化的角度，对其催化过程进行 了分析，得出稳定过渡态结构有利于酶促反应．酶一底物在反应物时相互作用仅仅是降低酶的 的结构较酶一底物复合物的结构更为有序． ·男，28岁，博士研究生 收稿El期：1996—12—17，国家自然科学基金资助课题 万方数据万方数据 626 化学学报 ACrACHIMICASINICA1998 1 实验部分 1．1试剂 =7．4的缓冲溶液，纯化的固体漆树漆酶由武汉大学资源化学研究所提供，用缓冲溶液配制成 一定浓度的溶液置于冰箱中备用． 底物：3，4一二羟基苯甲醛为化学纯、邻甲氧基酚为化学纯、邻苯三酚为化学纯、3，4，5一三 羟基苯甲酸为分析纯，用缓冲溶液配制成一定浓度的溶液，通氮气除去其中溶解的氧气 后备用． 1．2仪器 文献[8]． 2结果和讨论 2．1摩尔反应焓的测定 用微量热法测定化学反应的摩尔反应焓是利用热谱图的总面积(A)和仪器的标定常数 (K)，由下式求出 Q，=KA (1) 对于单底物酶促反应的摩尔反应焓用下式计算[8] △，H。=一Q。／n。 (2) 式中△，Hm表示摩尔反应焓，7rl。为底物总的物质的量． 4，5一三羟基苯甲酸的摩尔反应焓见表1． 表1漆酶催化氧化四种底物的热、动力学参数 (厶r日m，K。I七2。AGo，厶GT≠) 种5次实验的平均值，”三组实验的平均值． 应焓的差别不大，说明取代基的差异不是影响摩尔反应焓的主要原因