抗茉莉酸甲酯单抗制备及小麦和黑麦草颖花中茉莉酸含量的测定.pdf

第37卷第5期 实验生物学报 V01．37．No．5 2004年10月 Acta Sinica 0ctober2004 BiologiaeExperimentalis 抗茉莉酸甲酯单抗制备及小麦和黑麦草颖花中 茉莉酸含量的测定木 燮1 甘立军1夏凯1王才林2周 (‘南京农业大学生命科学学院，南京210095；2江苏省农业科学院粮食作物所，南京210095) 摘要本文报道了识别茉莉酸甲酯(MeJA)的单克隆抗体的制备。该抗体源于以茉莉酸的C—l位羧 基为偶联位点，钥孔娥血蓝蛋白为载体合成的免疫原。该抗体对甲酯化茉莉酸的识别力明显强于对 茉莉酸(JA)的；JA分子中戊烯侧链的完整性对该抗体的识别力有很大影响。于该侧链的C一9和C一 该抗 10位加氢(形成Dihydro．JA)，或除去C一12(形成JAS一25)，都会大幅度降低该抗体的结合活性。 体对亚麻酸、南瓜酸、冠毒素及Theobroxide均无识别力。用该抗体建立了定量检测JA的固相抗体 MeJA。 型酶联免疫吸附定量测定法，检测范围为2．06—500pmol 并探查了小麦及黑麦草开颖前 后颖花的JA含量。发现随着开颖时间的临近，JA含量显著升高；颖花开放时达到最大值，随后急剧 下降。 关键词：茉莉酸单克隆抗体酶联免疫吸附测定法颖花开放小麦黑麦草 茉莉酸类(iasmonates，JAs)是以茉莉酸(jas—真实信息?因为JAs等内源植物激素在同一器官不 monir acid，JA)和茉莉酸甲酯(methyljasmonate，同组织之间甚至同一组织各个细胞之间的分布往 往是十分悬殊的。这些差异的确认单靠定量检测技 MeJA)为主体的一类环戊烷类化合物。由于JAs是 植物自身合成的，对植物的生命活动具有多种重要 术是不能完成的，需要同时取得定位的证据才行。 的调节功能，1998年8月，在16届IPGSA(Intema—对于细胞内JA区域化分布的认识则更有赖于免疫 tionalP1antCrowthSubstances Association)大会上，定位技术的发展，也即有待制备抗JA的McAb，并 和油菜素内酯类(Brassinosteroids，BRs)及水杨酸类 在此基础上建立酶联免疫吸附测定法(Enzyme— linkedimmunosorbent (salicylates，sAs)一起被列入植物激素名单，使公认 的植物激素从经典的五大类(生长素类、细胞分裂 学定位(immunocytochemistry)技术。 素类、赤霉素类、脱落酸及乙烯)扩展成八类…。 1 材料与方法 早期研究大多偏重于JAs对植物的抑制效应 (芽、种子、花粉粒的萌发、茎和叶的生长、叶绿素合 1．1化学试剂、细胞及实验动物 成等)和促进效应(离层形成、气孔关闭、花青素合 茉莉酸(3Rs，7RS．JA，jasmonicacid)，亚麻酸 成等)㈦。上世纪九十年代前后，才开始认识到JAs具 (Lin01enicacid，LA)购自Sigma公司；3RS，7Rs- 有多种独特的生理效应：它不仅在植物感受创伤和 chemical Me