史氏鲟肠道微生物基因组DNA提取方法的研究.pdfVIP

湖南农业科学 2011，(11)：129～131 HunanAsriculturalSciences 史氏鲟肠道微生物基 因组 DNA提取方法的研究 张 旭 ，杨元金 ，王京树 ，田 甜 (中国长江三峡集 团公司中华鲟研究所，湖北 宜昌 443100) 摘 要 ：以史氏鲟肠道内容物及鲜活肠道为样本，用PBS多次洗涤，离心样品，沉淀菌体。提取肠道菌群总DNA，电泳结果显示 ， 样 品DNA条带可用于后续分子生物学试验研究。通过细菌通用引物，对其 16SrDNA基因进行 PCR扩增，得到较清晰的图谱 ，条 带整齐，表明采用该方法可以用于提取鱼类肠道微生物群落的DNA，且简单、准确、可行。 关键词：史氏鲟；肠道细菌；DNA提取方法 中图分类号：$965．215 文献标识码：A 文章编号：1006—060X(2011)11-0129—03 ExtractionM ethodofGenomicDNA from IntestinalM icroorganism of Ac咖enserschrenkiBrandt ZHANGXu，YANGYuan—jin，WANGJing-shu，TlANTian (InstituteofChineseSturgeon,ChinaThreeGorgesCorporation,Hubei443100,PRC1 Abstract：Takingthe intestinalsubstanceand livelyintestinaltractofAco,enserschrenkiBrandtassampleto precipitatebacteriathroughPBScleaningandcentrifuge．TotalDNA ofintestinalbacteriawasextractedtoinvestigate intestinalmicroflora．Theresultsofelectrophoresisimpliedthatthebanding—patternsofdifferentsamplescanbeusedfor theM lowing molecularbiologicalexperiment．The 165 rDNA in these DNA sampleswasamplified by PCR with universalprimers0fbacteria．theclearatlasandtheneatlybandswereobtained．ItiSindicatedthatusingthismethodto extractDNAofintestinalmicroflorafrom fishiSsimple．accurateandfeasible． Kevwords：Atipe e，schrenkBrandt；intestinalbacteria；DNAextraction 在动物肠道的微生态系统中，微生物之间和微 物的研究报道 ，为此 ，选用史 氏鲟幼鱼肠道为研究 生物与宿主之问存在着复杂而又相对稳定的联系， 材料 ，通过肠壁 内容物和直接取鲜活肠道提取肠道 宿主为肠道微生物提供栖息的环境，而肠道微生物 微生物群落DNA的效果对 比，为鲟鱼肠道微生物 又能提高宿主对有害细菌侵染的抵抗力。大量研究 多样性研究提供科学依据 。 结果表明，动物肠道正常微生物区系在动物营养、健 1 材料和方法 康 、免疫等方面发挥着极为重要的作用l】]，它是由多 种微生物构成的具有广泛多样性和复杂相互作用的 1．1 材 料 微生态系统。鱼类肠道正常菌群是肠道的重要组成 1．1．1 供试材料 史 氏鲟活鱼苗。 部分，是肠道微生物与宿主以及所处的水环境之间 1．1．