猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定.pdfVIP

第45 卷第12期 东 北 农 业 大 学 学 报 45(12): 10~17 2014 年12月 Journal of Northeast Agricultural University Dec. 2014 网络出版时间2014-12-29 8:58:54 [URL] /kcms/detail/23.1391.S0858.002.html 猪轮状病毒DN30209 株VP4 全长蛋白表达及多抗制备和鉴定 任晓峰，窦秀静, 郝雅环，孙刘妹，魏小宁 （东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030 ） 摘 要：为开展猪轮状病毒（PRV ）及其VP4 蛋白相关特性研究，参照GenBank 所收录的猪轮状病毒JL94、 OSU 等株序列设计一对特异性引物，从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209 株扩增约2 330 bp VP4 全长基因， 并成功构建重组质粒VP4-pMD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明，DN30209 株VP4 全基因长2 331 bp ，与参考株JL94 的核苷酸同源性为99.7% ，氨基酸同源性为99.5%。将VP4 基因连接到pGEX-6P- 1原核表 达载体中，构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-pGEX-6P- 1。阳性重组质粒转化Rosetta 宿主菌感受态 细胞中，经IPTG 诱导，获得以包涵体形式表达的重组蛋白，融合蛋白大小约为112 ku ，与预期大小相符。回收、 纯化并复性该蛋白，将其作为免疫原免疫大白兔，制备兔抗PRV VP4 全长蛋白多克隆抗体，间接ELISA 测定多抗 5 效价到110 ，间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western blot ）检测表明该多抗均可与PRV 具有很好的抗原抗体反应 性，为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。 关键词：猪轮状病毒；克隆；原核表达；抗体制备 中图分类号：S858 文献标志码：A 文章编号：1005-9369（2014 ）12-0010-08 任晓峰, 窦秀静, 郝雅环, 等. 猪轮状病毒DN30209 株VP4 全长蛋白表达及多抗制备和鉴定[J]. 东北农业大学学报, 2014, 45 (12): 10-17. Ren Xiaofeng, Dou Xiujing, Hao Yahuan, et al. Expression VP4 complete protein and polyclonal antibodies preparation or detection of porcine rotavirus DN30209 strain[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2014, 45(12): 10-17. (in Chi- nese with English abstract) ExpressionVP4 completeproteinandpolyclonalantibodiesprepara- tionordetectionofporcinerotavirusDN30209 strain/REN Xiaofeng, DOU Xiujing, HAO Yahuan, SUN Liumei, WEI Xiaoning(School of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China) Abstract: Tostudyporcinerotavirus(PRV) VP4 proteinlevelsrelatedexperiments,wereferedto GenBankPRVJL94,OSUstrai