真菌Penicillium C3a培养条件的优化.pdfVIP

第27卷第4期 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 Vo1．27，No．4 2011年 7月 JournalofQiqiharUniversity July，2011 真菌PenicilliumC3a培养条件的优化 夏永茂 ’，张伟伟 (1．齐齐哈尔市种子管理处，黑龙江 齐齐哈尔 161006；2．齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘要：在碳源、氮源、表面活性剂、最适温度和最适pH等方面对其培养条件进行优化，用DNS法测定在不同培 养条件下纤维素酶的活性。真菌PenicilliumC3a的最适产酶培养条件为：1．5 L的葡糖糖为碳源，1．5g，L的尿素 为氮源，添加O．5mv【的表面活性剂吐温一20，pH5．0，培养温度为35~C。 关键词：纤维素酶；真菌PenicilliumC3a；酶活；DNS法 中图分类号：$831 文献标识码：A 文章编号：1007—984X(2011)o4—0053—04 随着我国规模养禽业的迅速发展，出现了饲料短缺，豆粕、玉米等价格上涨问题，开发新的饲料来源， 缓解饲料原料的供需矛盾 日益受到人们的重视川。植物秸秆、糠壳等农副产品是最广泛的饲料资源口，但其 主要成分是纤维素，无法被禽类消化吸收。如何利用这一资源就显得尤为迫切和必要。自然界中有很多微 生物类群能够分泌纤维素酶降解和利用纤维素，例如真菌，放线菌、细菌、部分酵母菌和木霉等p ，获得 纤维素酶的方法中基因克隆对技术和设备要求较高，成功率较低，可操作性差。通过菌种筛选、诱变和优 化菌株产酶条件来提高菌株产纤维素酶活力仍为当前首选方法。本试验就是以从鸡的嗉囊中分离得到的真 菌Penicillium C3a为实验材料，在碳源、氮源、表面活性剂、最适温度和最适pH等方面对其培养条件进 行优化，用DNS法测定在不同培养条件下对纤维素酶活性的影响，以期得到最优的培养条件，提高产酶量， 为真菌PeniciHiumC3a在降解纤维素方面提供理论依据，也可为工业化获取纤维素酶提供技术支持和保障。 1 材料与方法 1．1 材料 真菌PenicilliumC3a，分离 自鸡嗉囊，由本实验室保存。 1-2 方法 1．2．1 粗酶液的制备 将发酵培养液用8层纱布过滤，4000rra／in离心，上清液为粗酶液。 1．2．2 酶活的测定—-DNS法 (1)羧甲基纤维素酶活 (CMCase) 取0．01mL粗酶液，稀释 10倍，加 1．5mL柠檬酸缓冲液、1．4mL1．0％CMC水溶液，50C水浴反应 30min。加入等体积的DNS试剂 ，沸水浴5rain，冷水中冷却后，550nm下测OD值，SPSS13．0进行数据 分析。 (2)滤纸酶活 (FPase)、13一葡萄糖苷酶活：方法 (1)o规定 1mL粗酶液每60min分解底物产生 lp．g 葡萄糖=1U／mL。 (3)葡萄糖标准曲线测定 配置浓度为50，100，150，200~g／mL的葡萄糖水溶液，取3mL葡萄糖溶液，加人 3mLDNS缓冲液， 沸水浴反应5min，冷水中冷却后 ，550nm下测OD值。 1．2．3 培养条件的优化 从碳源、氮源、表面活性剂、最适温度和最适pH等方面对其培养条件进行优化，酶活测定采用DNS 收稿 日期 ：2011-04—15 作者简介：夏永茂(1961一)，男，齐齐哈尔讷河人，农艺师，学士，主要从事遗传育种研究，xym6106@163．e．om。 · 54· 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 法。 1-2．4 数据分析 采用SPSS13．0软件进行统计分析，Origin7．5作图。 2 结果及讨论 2．1 碳源对产酶活力的影响 在无机盐发酵培养液中分别添加O．5，1．0，1．5，2．0，2．5， 3．0g／L的葡糖糖，2．0g／L的玉米秸秆粉、稻草粉、麦麸粉、大 趔 豆秸秆粉(图中编号 l一10)，在无菌条件下接人等量的真菌 PenicilliumC3a，3612培养 3d，测定 3种酶活 (每种做 3次平