肝纤维化大鼠SGK1的表达与肝星状细胞活化的关系及坎地沙坦对SGK1的影响.pdfVIP

·518 · ProceedingofClinicalMedicine，Ju1．2Ol1，Vol20No．7 — — 文章编号 ：1671—8631(2011)O7一O518—03 肝纤维化大 鼠SGK1的表达与肝星状细胞 活化的关系及坎地沙坦对 SGK1的影响 张舒静 ，师水生，田 慧，张佑蕊 (山西医科大学第二临床医学院，山西 太原 030001) 摘要 目的：观察血清和糖皮质激素调节蛋 白激酶 1(SGK1)的表达与肝星状细胞 (HSC)活化 的关系，并探讨选 择性血管紧张素Ⅲ受体亚型AT1拮抗剂坎地沙坦对 SGK1的影响。方法：将 36只Wistar大鼠随机分为 3组：正常对 照组、肝纤维化模型组和坎地沙坦治疗组。采用复合法复制肝纤维化模型，坎地沙坦治疗组于第 7周初时用大 鼠灌 胃 针灌注药物，实验于 10周末全部结束。苏木精一伊红染色法(HE法)和马松三色染色法(Masson法)观察肝组织病理学 改变 ，应用免疫组织化学法检测 a一平滑肌肌动蛋 白(a—SMA)和 SGK1在肝 内的表达及定位 ，并应用 图像分析系统对 其阳性表达结果进行半定量分析 。结果：各模型组 a—SMA，SGK1的表达量较正常对照组 明显增多 (PO．O1)；坎地沙 坦 治疗组a—SMA和SGK1的表达量较 同期纤维化模型组 明显减少 (P0．05)。统计结果表 明二者呈正相关 (r一 0．899，PO．001)。结论 ：SGK1参与了肝星状细胞 的激活，坎地沙坦可以抑制肝纤维化的发展 ，其机制可能与 HSC活 化受抑、sGK1表达减少有关 。 关键词 肝纤维化 ；糖皮质激素调节蛋 白激酶 1；坎地沙坦 中图分类号：R653．7 文献标识码 ：A 肝星状细胞(HSC)的活化是肝纤维化的中心环节，a一平 于第7周开始用大鼠灌胃针灌注药物(2mg·kg。·h。)。N 滑肌肌动蛋白(a—SMA)的表达为HSC激活的标志[1]。随着 组及M组给予等量的生理盐水灌胃，于第6周末用 10％水 对肝纤维化研究的深入进行，发现肝纤维化的发生与血清和 合氯醛3mL／kg麻醉后，随机处死M组一批动物(6只)，第 糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)有关 ]。 8周和第lO周末再分批处死M组和Z组各一批动物(每批 血清和SGK1是丝氨酸／苏氨酸(Ser／Thr)蛋白激酶家 6只)，N组于实验结束时全部处死。 族的一个新成员，与蛋白激酶B(PKB／Akt)有极高的同源 1．3 数据检测 性[3]。SGK1参与了人体许多重要的生理过程，在糖尿病肾 取新鲜的肝组织作苏木精一伊红染色法(HE法)和马松 病、肝硬化等多种纤维化疾病中SGK1的表达明显高于正常 三色染色法(Masson法)，免疫组织化学染色检测SGK1和 组织 。]，但SGK1与肝纤维化的关系尚在研究中。 a—SMA表达量。肝组织石蜡切片、脱蜡、水化、PBS漂洗、抗 1 材料与方法 原修复，滴加 1：200的一抗4℃过夜，再滴加相应的二抗 1．1 主要试剂与药物 (二氨基联苯胺)DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。采 CC14购白北京化学试剂公司；坎地沙坦(日本武田药品 用BJ200o图像分析系统半定量分析该组织切片的胶原面积 工业株式会社)；兔抗SGK1多克隆抗体(bioworld公司)；d— 百分比和SGK1及a—SMA平均阳性细胞表达率。 SMA抗体(北京博奥森公司)。 1．4 统计学方法