人胚骨髓基质细胞饲养层对人胚胎生殖细胞生长的作用.pdf

第25卷第3期Vol.25,No.3 生 殖 与 避 孕 2005年3月Mar.2005 Reproduction Contraception 实验研究 人胚骨髓基质细胞饲养层对人胚胎 生殖细胞生长的作用 姜景岩 孔北华 刘星霞 侯怀水 马秀峰 沈柏均 时 庆 山东大学齐鲁医院 济南 250012 摘要 目的 研究人胚原代骨髓基质细胞(BMSC)饲养层对人胚胎生殖细胞(hEGC)生长的支持 作用 方法 以非意愿妊娠流产胎儿股骨为材料制备BMSC饲养层 同时取胎儿组织分离培养人 成纤维细胞 以成纤维细胞培养液上清制备条件培养液 CM 另取13.5 d胎鼠制备原代小鼠胎 儿成纤维细胞 PMEF饲养层 分组培养人原始生殖细胞:A组(PMEF饲养层) B组 BMSC饲养 层 C组 CM D组 BMSC饲养层+CM观察不同条件下hEGC生长增殖行为 结果 D组与A 组均有利于支持人胚胎生殖细胞的体外生长 并保持其不分化的状态和多分化的潜能,两组比较无 明显差异 单用B组可支持人胚胎生殖细胞的体外生长 但效率低于上述两组 单用条件培养液 不能获得贴壁生殖细胞克隆 结论:BMSC饲养层+CM可支持hEGC的体外培养,且无异源性蛋白的 污染,更有利于临床应用 关键词 胚胎生殖细胞 原始生殖细胞 骨髓基质细胞 饲养层 中图分类号 R711.6文献标识码 A 文章编号 0253-357X200503-0131-06 人胚胎干细胞包括来源于内细胞团的胚胎干细 hEGC的效果,为hEGC的临床应用研究奠定基础 胞(human embryonic stem cells, hESC)和来源于 1 材料和方法 原始生殖细胞的胚胎生殖细胞 human embryonic germ cells,hEGC,其分离培养首先要解决的问题 是抑制其分化倾向,保证细胞的多能性 同时给予合 1.1BMSC饲养层的制备 适的营养物质及促生长因子以促进其增殖 文献资 取8-12周非意愿妊娠流产胎儿 75%酒精浸 料显示目前多以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层来支 泡5min分离其股骨 用注射器吸DMEM培养液 持人胚胎干细胞的体外培养 但胚胎干细胞的最终 (GIBCO)1 ml冲洗股骨髓腔,冲洗液经200目的铜网 研究目的是为了应用于临床,鼠源性的饲养层无疑存 过滤 滤液用DMEM离心洗涤2次,用含10%小牛血 清的DMEM重悬细胞后 7 在着异源性蛋白污染的问题 Friedenstein等[12] 以(1-2)10/ml密度接 2 种于25cm培养瓶内 37 5%CO培养 d3全 30年前提出骨髓中存在成体干细胞,可诱导分化为 2 造血细胞 神经胶质细胞 骨骼肌细胞和心肌细胞 量换液,以后每周两次半量换液,以去掉造血细胞的 这提示我们骨髓中存在着维持干细胞未分化状态的 影响 2-3周铺满瓶底,丝裂霉素C 物质 为此本文旨在探讨利用人胚原代骨髓基质细 MMC)处理1-2 h,PBS冲洗5遍备用 胞(bone marrow stromal cells,BMSC)饲养层培养 1.2条件培养液 的 制备 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No: