口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达.pdf

·50· 生物技术 中国畜牧兽医 2009年第36卷第10期 口蹄疫病毒卯1基因的原核可溶性表达 王海烽1”，易忠1，魏玉荣1，魏婕1’2，胡尔马西1，符子华1 (1．新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁木齐830000；2．新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐830052) 摘要：针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题，作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、 PAGE检测可见约29ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在，上清中的可溶性蛋白甚微。试验 结果表明．这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。 关键词：口蹄疫病毒；VPl基因；原核；可溶性表达 中图分类号：$852．65+9．6 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2009)10-0050—05 andmouth 口蹄疫(food disease，FMD)是哺乳翻译方式，决定了大部分蛋白主要以包涵体的形式 动物的一种高度接触性传染病，由口蹄疫病毒(foot存在，这就需要对包涵体进行溶解、复性，由于条件 andmouthdiseasevirus，FMDV)引起，对易感偶蹄限制，所选用的复性方法多种多样，且复性的效果也 兽具有严重的危害。口蹄疫病毒为单股正链RNA 不尽如人意，因此探索原核表达目的蛋白的可溶性 病毒，由约8500个核苷酸组成。完整的口蹄疫病毒表达条件是本试验的研究重点。 粒子(146S)的衣壳由1A(VP4)、1B(VP2)、1C1材料与方法 1．1 载体和工程菌 含有0型FMDVVPl基因 (VP3)和1D(VPl)4种结构蛋白组成(殷震等， 1997；Doel等，1982)。VPl蛋白是口蹄疫病毒的主 要结构蛋白，位于衣壳表面，是刺激动物机体产生特 兽医研究所传染病研究室)构建；pGEM～TEasy载 异性抗体的主要抗原。由于原核生物特殊的构造和 和BL2l(DE3)表达宿主菌由本实验室保存。 收稿日期：2009—04—24 1．2试剂DNA聚合酶、T4DNA连接酶为Pro— 作者简介：王海烽(1984一)，男，河南人，硕士生，主要从事动物 I等限制性内切酶购 mega公司产品；Nde工和Xho 分子病毒及免疫学研究。 自大连宝生物工程有限公司。 通信作者：符子华(1955一)，男，江西人，研究员，硕士生导师，主 1．3 引物设计 根据本实验室构建的FMDV—VPl 要从事家畜传染病学研究。E-mail：zihuaj@yahoo． COm．Cn DNA ofthecDNAforthePrecursorof and Sequence Cloning Analysis ZiGooseFollicle HormoneSubunit Stimulatingp CAIJun，YANGHuan—min，LI Li Peng，GU0 ofAnimalScienceand FirstLandReclamation 163319，China) (College Technology，HeilongjiangAugust University，Daqing