比色法快速测定糖化酶活力的新方法.pdfVIP

维普资讯 第2期 河北省科学院学报 比色法快速测定糖化酶活力新方法 孙淑琴 邵冬梅 6、 (河北省科学院微生物研究所 071051保定) 【摘要】本文介绍比色法测定糖化酶活力新方法。糖化酶水解淀粉产生葡萄糖，生成的葡萄糖 与3，5一二硝基水杨畦钠盐(DNS)作用，发生颜色改变．颜色变化的多少与葡萄糖含量成正 比。因此糖化酶水解液与DNS反应后，在550rim处测定吸光度，由吸光度看出葡萄糖含量，并 计算 出糖化酶的活力。比色法简单、快速，准确度和标准法相当，是仪器分析测定糖化酶活力的 理想方法。 关【键词】比色法．糖化酶 确 而 次碘酸盐容量法，是我国测定糖化酶的标准方法(标准法)，方法 准确、可靠。而容量分析 比较烦索．用的玻璃仪器较多，对化验人员的素质要求较高。B一淀粉酶(即糖化酶)用DNS显 色测定虽有记载 “，但由于其测定条件与标准法相差太大，致使两种测定结果无法比较。 作者在以上两种测定方法的基础上。做了一系列条件试验，选出了酶反应及显色的最佳条 件。建立了比色法测定糖化酶活力的新方法(比色法)，此方法简单、快速、数据准确、可靠。用 比色法和标准法测定的酶活力之比在0．98～1．02之间。是中空纤维超滤法提糖化酶工艺中， 监测酶活力和菌种选育中大量样品测定的理想方法。 原理：以3．5一二硝基水杨酸比色法测定糖化酶水解淀粉产生葡萄糖的量表示酶活性。 定义 在40CpH46条件下，每小时水解淀粉产生 1毫克葡萄糖作为一个酶活力单位。 1 材料与方法 1．1 试荆 (1)0．2M醋酸缓冲液pH46 称取醋酸钠 (c：HO：Na 3Hz0)1340克于烧杯中，以蒸馏 水溶解，加入冰醋酸(czH．Oz)5．2毫升，定容至1000毫升容量瓶中摇匀．以酸度计校正误差士 0．02。 (2)2 可溶性淀粉 取约5O毫升蒸馏水煮沸加入到含2克淀粉的少量蒸馏水溶解液中， 再煮沸一分钟，冷却，加入 10毫升02M醋酸缓冲液．定容至100毫升容量瓶中。 (3)3．5一二硝基水杨酸水溶液(DNS) 称取3，5一二硝基水杨酸10克，酚2克，亚硫酸钠 0．5克，氢氧化钠 10克，酒石酸钾钠 200克．置于1000毫升烧杯中，用蒸馏水加热溶解，冷却 至室温，定容在 1000毫升容量瓶中，摇匀于棕色瓶中贮存。放置一周作标准曲线后使用。 1．2 仪器设备 维普资讯 河北省群学院学报 1997篮 721型分光光度计．水浴锅．600W 电炉．磨口带塞试管等 1．3 标准曲线绘制 准确称取于 105℃～110~C干燥后的葡萄糖5O毫克，用蒸馏水溶解．定容至50毫升容量 瓶中．配成1毫克／毫升标准溶液。按表 1比例操作后。开水煮沸l5分钟，冷却。加入 10．5毫升 蒸馏水，摇匀．于721型分光光度计 0．5era比色皿．550rim 比色。 衰 1 编号 含G量 1毫克／毫升G蔽 蒸馏水 (毫克) (毫升) (毫升) DNS蔽(毫升) 0 0 0 0．5 l_5 l 0．1 0．1 0．4 1．5 2 0．2． 0．2 0．3 1．5 3 0．3 0．3 0．2 1．5 4 0．4 0．4 0．1 1．5