基于HPLC技术的代谢组学方法发现S180与H22小鼠肿瘤标记物研究.pdfVIP

基于HPLC技术的代谢组学方法发现S180和H22 小鼠肿瘤标记物的研究 孙小明1一，刘芸。2，邸多隆“，吴国泰3，郭红芸4 l中国科学院西北特色植物资源化学重点实验室和甘肃省天然药物重点实验室，兰州化学物理研究所，中 圉科拳院，兰州市夭水中路18号，730000 2中国科学院研究生院，北京玉泉路19号(甲)，100049 3药理教研室，甘肃中医学院，兰州市定西东路35号，730000 4甘肃省肿瘤医院和甘肃省医学科学院，兰州市小西湖东路2号，730050 【摘要】：天然产物化学研究中，亟需具有高通量的活性筛选方法，然而由于目前已知筛选模型有限， 因此高通量目标很难实现。该论文目的在于，通过评价由肿瘤细胞干预产生的代谢紊乱，进而找到潜在 生物标记物。采用HPLC．DAD技术建立了小鼠血浆代谢指纹图谱，方法学评价证明其稳定性和精密度 良好。采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘．判别分析(PLS．DA)多元统计分析方法寻找代谢物差异 并找到潜在生物标记物。紫杉醇用于体内抗S180和H22肿瘤活性研究，肿瘤生长抑制率作为评价指标， 此数据作为已建立模型的验证数据。最后，对标记物色谱数据和肿瘤抑制率进行偏最小二乘相关分析。 结果表明，建立的代谢指纹图谱平均相似度在0．8以上，建立的S180和H22两组化学计量学模型的预 在生物标记物。生物标记物的色谱数据和肿瘤抑制率数据具有显著相关性(P0．05)。该研究表明，基于 HPLC技术的代谢组学方法发现生物标记能够更清楚的明确机体的生理病理改变。建立的化学计量学模 型具有良好的预测能力，可用于后期的药物活性高通量的筛选。 【关键词】：代谢组学：代谢指纹图谱；多元统计分析；肿瘤标记物；HPLC．DAD 1、前言 代谢组学是系统生物学研究的重要平台，主要应用于临床前药学研究、疾病的诊断和 治疗研究【1，21。代谢组学主要对细胞、组织和机体内的内源性小分子量物质进行测定。多种 因素影响其含量和物质组成，其中包括基因、饮食、生活习惯和药物干预等方面【3】。明确 代谢组的物质基础，可以弥补生物化学上的缺陷并使寻找新颖的药物作用靶标成为可能【41。 寻找抗癌活性天然产物研究中，亟需稳定可靠的活性筛选方法。虽然目前动物和细胞 模型已经广泛应用于体内、体外活性评价研究中【5，6】，但是，生化和生理病理指标不能完全 揭露体内代谢物的微小改变【7】。代谢组学可以在药物发现、开发和毒性机理每一步骤中获 得更多的信息，因此，将其应用于药物研究中具有显著优判E91。 生物标记物的发现常受到分离分析技术和生物体复杂性的干扰。代谢指纹图谱是代谢 组学研究的重要内容之一，其特点在于不需要鉴定每一个具体化合物，而是通过整体的光 谱图或色谱图来反映其整体改变【101。核磁共振光谱(NMR)技术具有无偏性，已经用来对 代谢物、药物和体内的有毒试剂进行分析【111。然而，该方法灵敏度低于质谱(Ms)方法， 并且低浓度的标记物不能检测。因此，目前色谱和质谱联用技术已被广泛应用于疾病诊断、 毒性机制、微生物和植物代谢组学研究中【12‘151。除此之外，毛细管电泳技术也被用于代谢 指纹图谱研究中【161。由于GC．MS需要样品具有挥发性才能检测，因此，非挥发性物质不能 1．4968248 3通讯作者：邸多隆，E-mail：didl@licp．C8S．cn；Tel：093 孙小明：女，1982年出生，博上研究生，从事药物分离分析研究工作。 135 检鲫或通过行亍生化步骤才可实现。液质联用技术cLC-MS)与GC-MS相比不需要对化台物 进行衍生化处理，因此可分析更多化舍物“”。HPLC-DAD是一种目前被广泛应用的可靠的 分析拄求，有研究者用该技术建立了血浆指纹图谱‘珥圳。然而，目前并没有一种技术可以 无偏的对血浆中所有样品进行分离分析。同时，尚无采用该方法应用于建立活性筛选方挂 的研究。因此，本课题组丌展了寻找特异的标记物的研究，该部分是采用代谢组学方法建 立抗肿瘤天然产物活性筛选方法的第一步。 2、结果和讨论 1．1代谢指纹图谱的建立 通过优化色谱条件．建立Y4鼠血浆代谢指纹图潜，如图1所示。其中峰9和峰10 分别为尿酸和胞嘧啶核苷。方