暗纹东方鲀化学感觉行为学研究及相关分子生物学探索.pdf

暗纹东方纯化学感觉行为学研究以及相关分子生物学探索 摘要 暗纹东方纯化学感觉行为学研究 以及相关分子生物学探索 中文摘要中又捅斐 暗纹东方纯是基因组模式生物生物——红鳍东方纯在我国特有的近缘种之一。其 对化学刺激的应答模式的研究一直没有实质性进展。红鳍东方纯和斑马鱼等模式生物 存在一种和化学感觉相关的味觉受体基因，但是这些味觉受体基因究竟与哪些化学感 觉行为有关联性均没有报道。本研究对不同化学物质处理下暗纹东方纯的感觉行为进 行了统计分析，得到了暗纹东方纯两种规格鱼针对各种物质的不同的诱因系数，实验 结果显示不同规格的暗纹东方纯在化学感觉偏好上没有明显差异。对几种肉类行为反 应上，实验鱼明显偏好南美白对虾肌肉、鸡肉浆和蜢蛏肉。对植物的行为反应上，实 验鱼比较偏好芹菜茎。对几种氨基酸及其衍生物的行为反应上，实验鱼比较偏好甘氨 酸、丙氨酸、牛磺酸和DMPT，对酵母浸膏有微弱的回避反应。行为反应与物质浓度 无必然正相关关系。 通过对暗纹东方纯味觉受体相关候选基因克隆以及组织差异性表达谱的研究，结 合暗纹东方纯的化学感觉行为和生物信息学分析，对暗纹东方纯化学感觉行为与味觉 应答的分子机理进行了研究，以期了解味觉受体基因在化学感觉行为反应中可能存在 的作用。 根据NCBI公布的鱼类味觉受体相关基因序列设计了多组特异性引物，用PCR 暗纹东方纯基因组中克隆了3条包含完整ORF框的味觉受体基因(T2R1为921 bp， T1R2b为3124 bp，T1R1为3376bp)，2条T1R2a的基因片段(分别为1072 bp和1694 bp)。测序后与红鳍东方纯相应的序列比对发现，T2R1序列同源性高达99．2％，有 7个碱基差异，推测的表达蛋白有5个氨基酸差异；T1R1序列同源性达98．9％，相 差27个碱基，推测的表达蛋白有11个氨基酸差异。T1R2b序列同源性达99．2％，相 差19个碱基，推测的表达蛋白有8个氨基酸差异。克隆的T1R2a基因片段序列同源 暗纹东方纯化学感觉行为学研究以及相关分子生物学探索 摘要 性达98．3％，相差47个碱基。 通过生物信息学分析可知，得到的味觉受体第1家族的T1R1和T1R2b都符合此 家族基因的6外显子、5内含子结构特征，翻译蛋白质相应的位置出现了此家族信号 位点和功能域。得到的味觉受体第2家族的T2R1基因无内含子，符合此家族基因的 结构域特征。预测蛋白质的结构分析证明此类味觉受体基因属于G蛋白偶联受体超 家族的成员。 暗纹东方纯味觉受体在各组织中出现表达差异：T2R1在口腔上皮中表达量高于 其他各组织，各基因在其他组织中的表达量极少，提示味觉受体基因可能和化学感觉 行为瞬间反应关联性不大。 关键词：暗纹东方纯；味觉受体基因；化学感觉行为 作 者：马嵩 指导教师：陈葵 徐世清 Il and GentofObscure fasciatusBSTRACT Studies011ChemicalSensationBehaviourTaste Receptor pufferTakifugu onChemicalSensationBehaviourandTaste Studies GeneofObscure Recepto