透明质酸摇瓶发酵条件的优化.pdfVIP

江苏农业科学2013年第4l卷第2期 黄小忠，高大响，张雪松．透明质酸摇瓶发酵条件的优化[J]．江苏农业科学，2013，41(2)：311—313 透明质酸摇瓶发酵条件的优化 黄小忠，高大响，张雪松 (江苏农林职业技术学院，江苏句容212400) 摘要：为了进一步提高兽疫链球菌发酵生产透明质酸的产量，通过控制温度、pH值、发酵时间、装液量来优化发 酵条件。通过对结果的比较得出最适pH值、最适温度、最适发酵时间、最适装液量。发现在36℃条件下菌体量最 多，在38℃条件下透明质酸产量最高；pH值为7．0时菌体量最多，pH值为7．5时透明质酸产量最高；发酵时间为 24 h时，透明质酸产量最高、菌体量最多；装液量在40％时，透明质酸产量最高，菌体量最多。 关键词：透明质酸；优化；摇瓶发酵 中图分类号：TQ920．6文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)02—0311—03 为工业化生产提供参考。 透明质酸(hyaluronicacid，HA)别称玻尿酸，是一种酸性 黏多糖，是由卢一D一葡萄糖醛酸和卢一D—N一乙酰氨基葡萄 1材料与方法 糖的双糖单位反复交替连接而成的连锁状高分子物质，是链 球菌、绿脓杆菌等菌株荚膜的主要成分…。透明质酸以其独 1．1试验材料 特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功 1．1．1试验菌种试验菌种为兽疫链球菌。 能，如润滑关节、调节血管壁的通透性、调节蛋白质、水电解质 1．1．2培养基配方种子培养基(1L)：葡萄糖5．0g，蛋白 扩散及运转、促进创伤愈合等。目前透明质酸的生产方法逐 胨10．5g，牛肉膏5．5g，酵母膏7．14g，酵母粉2．5g，磷酸二 渐由动物组织提取法转向微生物发酵法。细菌发酵法生产透 氢钾2．0g，硫酸镁0．5g，琼脂2％，pH值7．0。 明质酸具有产量不受原料资源的限制、成本低、产量高、有较 液体培养基：以种子培养基为基础，不加琼脂。 高的相对分子量、分离纯化工艺简便、易于大规模生产等特 1．1．3试验试剂CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)溶液，无 点，已经成为透明质酸生产的发展方向。在我国，透明质酸的 菌水，去离子水等。 供需存在很大缺口，大部分透明质酸还需要从国外进口怛3。 1．1．4试验器材超净工作台，离心机，摇床，分光光度计， 为满足国内外日益增长的市场需求，我国应大力发展微生物 培养箱，三角瓶，试管等。 发酵法制备透明质酸的技术，选育高产菌种，完善发酵工艺， 1．2试验方法 以提高透明质酸生产工业化的产量和质量。本研究以兽疫链 1．2．1 菌悬液的制备取斜面保藏的原始菌种，接种于新鲜 种子培养基上，于37℃培养14～16h。取5mL无菌水冲洗 球菌(Streptococcuszooepidemicus)菌株作为透明质酸产生菌， 500 进行摇瓶发酵条件优化，考察优化条件对透明质酸产量的影 斜面，经4 r／min离心10min，去上清液；用无菌水洗涤沉 响，从而选择最佳发酵pH值、发酵温度、发酵时间及装液量， 淀2次，并将沉淀重新悬浮于5mL无菌水中，摇匀后倒入盛 有45mL无菌水的100mL三角摇瓶中，振荡10min口1。 收稿日期：2012—07—21 mL