枸杞色素抗自由基能力地测定.docVIP

枸杞色素抗自由基能力的测定 综述　以枸杞为原料,利用V (丙酮) ∶V (石油醚) = 1∶5为提取溶剂提取枸杞色素, 并用分光光度法测定枸杞色素,清除O2-自由基、·OH能力, ,然后再与传统的抗氧化剂VE、VC 进行比较,综合评定枸杞色素的抗氧化能力。 实验材料与仪器 实验药品：维生素C 维生素E 无水乙醇 丙酮 邻苯三酚 三羟基甲基甲烷 双氧水 盐酸奈乙二氨（分析纯） 水杨酸 盐酸 石油醚 枸杞 重蒸馏水 硫酸亚铁 实验仪器：见附表 试验方法 枸杞色素的制备 将枸杞干果进行粉碎,过60目筛, 60 ℃烘干,用V (丙酮) ∶V (石油醚) = 1∶5的混合溶剂在50 ℃进行浸提3次,每次2 h,得到枸杞色素提取液,减压真空浓缩,回收提取液,得到枸杞色素浓浸膏,色素进行真空干燥,得到枸杞色素粉末。 2. 抗氧化性实验 2.1 枸杞色素对羟自由基( ·OH) 的清除实验 按照Smirnof (1989)的方法, 利用H2O2 与Fe2+混合产生·OH 在体系内加入水杨酸捕捉·OH 并产生有色物质, 该物质在510 nm 下有最大吸收。反应体系中含9.8 mmol/L H2O2 2 mL, 9 mmol/LFeSO4 2 mL, 9 mmol/L 水杨酸- 乙醇2 mL, 不同浓度的枸杞色素溶液2 mL。最后加H2O2 启动反应, 37 ℃反应30 min, 以超纯水为参比, 在510 nm 下测量各浓度的吸光度。考虑到色素本身的吸收光值, 以9mmol/LFeSO4 2 mL, 9 mmol/L 水杨酸- 乙醇2 mL, 不同浓度的色素溶液2 mL 和2 mL 超纯水作为色素的本底吸收。清除率计算公式为: 清除率(%)= {A0-( Ax- Ax0)}/A0×100 % 式中: A0 : 为空白对照液的吸光度 Ax: 为加入色素溶液后的吸光度; Axo: 为不加显色剂H2O2 色素溶液本底的吸光度。 2.2 枸杞色素对超氧阴离子自由基( O2-·) 的清除实验 2.2.1 采用邻苯三酚自氧化法的测定 取5 mL, pH8.2, 50 mmol/L Tris- HCI 缓冲液。2 mL超纯水, 混匀后在25 ℃水浴中保温20 min。取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L 邻苯三酚0.5 mL(以10 mmol/L HCI 配制, 空白管用10 mmol/L HCI 代替邻苯三酚的HCI 溶液), 迅速摇匀后倒入比色杯, 420 nm下每隔30 s 测定吸光度值。 2.2.2 样品活性测定 在加入邻苯三酚前, 先加入一定体积的色素溶液,超纯水减少, 然后按采用邻苯三酚自氧化法测定的方法操作, 并计算抑制率。抑制率(I%)计算公式为:I%=[1- (A3- A4)/(Al- A2 )]×100 % A1 : 不含样品的吸光度值; A2 : 不含样品和邻苯三酚的吸光度值; A3 : 含有样品的吸光度值; A4 : 含样品, 但不含邻苯三酚的吸光度值。 表1 枸杞清除自由基能力的测定 编号 浓度(mg/mL) ·OH 清除率( %) O2-·清除率( %) 1 2 3 4 5 2.3 不同抗氧化剂清除·OH O2-·的比较 分别取枸杞色素、VC、VE 三种抗氧化剂按2.2 2.3 的方法测定对·OH O2-·自由基清除率 不同抗氧化剂清除·OH自由基的比较 抗氧剂类别 浓度( mg/mL) 清除率( %) 枸杞色素 VC VE 不同抗氧化剂清除O2-·自由基的比较 不同抗氧化剂清除·OH自由基的比较 抗氧剂类别 浓度( mg/mL) 清除率( %) 枸杞色素 VC VE