PowerPoint 演示文稿 - 河南师范大学.ppt

项目 遗传图谱 物理图谱 标 记 基因 多态性序列 STS 单 位 cM bp kb Mb 信 息 生物信息 物理信息 标 志 路标 界标 距 离 相对距离 绝对距离 位 置 连锁关系 相对位置 位置关系 绝对位置 分辨率 低 ,600kb 高，100kb 精确性 低 高 操 作 难度大 容易 3、序列图谱（人类基因组计划的核心） 1）概念：人类基因组30亿对核苷酸的排列顺序的图 2）测序流程： 选择物种 分离DNA 获得大量DNA 切割成重叠片段 片段插入载体 组装 测序 大量克隆 3）测序方法 　　　２0年前，一台仪器每天只能测５00bp，人类基 　　　因组测完需要１8000年，因此，有人激烈反对 　　　此计划， １985年发明的第一台测序仪仪每天测15000bp， 以后有加速到４00000 bp． 1998年发明ABI3700DNA分析仪、MegaBACE1000DNA 测序仪每分钟既可测12000bp，不到１５个月就测 完了人类基因组的９0％． 北京中心每天可测３千万bp，是世界上第六大测序 中心．费用也从开始的每碱基10美元降到了10美分 　　链终止法(１977,Sanger) 原理1:聚丙烯酰胺凝胶电泳可以把长度只差一个核苷 酸的单链DNA分子区分开 原理2：复制时ddNTP一旦结合上去，就使其它核苷酸 不能再往上结合，(ddNTP缺少可连接下一个核苷 酸的3’羟基）形成长短不一的单链DNA分子 每个反应器中有 3’ 5’ 单链DNA 5’ 3’ 引物DNA Klenow酶仅具3’ 5 ’外切活性 dNTP 其中dATP是32P标记的 ddATP 是双脱氧的 dNTP dNTP dNTP dNTP ddATP ddTTP ddCTP ddGTP 反应器１　　　反应器２　　　　反应器３　　　反应器４ ddATP ddATP ddATP ddATP 各反应器中的dNTP都用32P标记，利于电泳后观察 1 2 3 4 A T C G 1 2 3 4 A T C G 5’ TGATACGACGAAGTACTGG 3’ 3’ ACTATGCTGCT TCATGAC