PowerPoint 演示文稿 - 河南师范大学.pptVIP

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2015-09-12 发布于北京
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项目遗传图谱物理图谱标记基因多态性序列 STS 单位 cM bp kb Mb 信息生物信息物理信息标志路标界标距离相对距离绝对距离位置连锁关系相对位置位置关系绝对位置分辨率低 ,600kb 高，100kb 精确性低高操作难度大容易 3、序列图谱（人类基因组计划的核心） 1）概念：人类基因组30亿对核苷酸的排列顺序的图 2）测序流程：选择物种分离DNA 获得大量DNA 切割成重叠片段片段插入载体组装测序大量克隆 3）测序方法　　　２0年前，一台仪器每天只能测５00bp，人类基　　　因组测完需要１8000年，因此，有人激烈反对　　　此计划，１985年发明的第一台测序仪仪每天测15000bp，以后有加速到４00000 bp． 1998年发明ABI3700DNA分析仪、MegaBACE1000DNA 测序仪每分钟既可测12000bp，不到１５个月就测完了人类基因组的９0％．北京中心每天可测３千万bp，是世界上第六大测序中心．费用也从开始的每碱基10美元降到了10美分　　链终止法(１977,Sanger) 原理1:聚丙烯酰胺凝胶电泳可以把长度只差一个核苷酸的单链DNA分子区分开原理2：复制时ddNTP一旦结合上去，就使其它核苷酸不能再往上结合，(ddNTP缺少可连接下一个核苷酸的3’羟基）形成长短不一的单链DNA分子每个反应器中有 3’ 5’ 单链DNA 5’ 3’ 引物DNA Klenow酶仅具3’ 5 ’外切活性 dNTP 其中dATP是32P标记的 ddATP 是双脱氧的 dNTP dNTP dNTP dNTP ddATP ddTTP ddCTP ddGTP 反应器１　　　反应器２　　　　反应器３　　　反应器４ ddATP ddATP ddATP ddATP 各反应器中的dNTP都用32P标记，利于电泳后观察 1 2 3 4 A T C G 1 2 3 4 A T C G 5’ TGATACGACGAAGTACTGG 3’ 3’ ACTATGCTGCT TCATGAC