高等植物光系统Ⅱ外周蛋白结构和功能的研究.pdf

高等植物光系统Ⅱ外周蛋白结构和功能的研究 摘要 kDa的3 体醌QB，推动光合放氧和PSI／电子传递的运转。在高等植物中33、23和18 个外周蛋白结合于PSII的囊腔侧，对PSll放氧活力的维持起着重要作用。33kDa蛋白 对参与光合放氧的核心组分的锰簇具有保护作用，被称为锰稳定蛋白(manganese kDa蛋白与光氧化水释放氧的过程中Ca：+和c1。的结 stabilizingprotein,MSP)。23和18 合相关。本文通过多种生化、生物物理的手段分别对三个外周蛋白的结构和功能的进行 了研究，主要包括以下四个方面的结果。 1．酪氨酸残基参与维持33kDa蛋白的结构和功能 利用乙酰咪唑(NAI)化学修饰33kDa蛋白中的酪氨酸残基(T姐)。实验结果发现 kDa蛋白空阔构象中的位置可区分为暴露于表面、浅层包埋和深度 8个7yr按照它在33 在33kDa蛋白解析叠情况下才能被修饰。前5个Tyr被修饰后不影响33kDa蛋白的重 kDa蛋白结 组和恢复放氧能力。内源荧光和远紫外圆二色谱(CD)的测定显示此时33 kDa蛋白重组到PSII膜上和恢复放氧 构没有变化，表明这些暴露于表面的Tyr对于33 活力并不重要。当33 kDa蛋白不能 kDa蛋白中被修饰的ryr个数增总数达到6．4时33 重组到PSII膜．卜去，放氧活力也得不到恢复。33kDa蛋白的荧光光谱和CD光谱发生 了明显变化，表明6．4个Tyr被修饰后的33kDa蛋白发生结构J二的改变是其失去重组及 kDa蛋白的结构 恢复放氧活性的根本原因，同时说明有1-2个浅层包埋的Tyr在维持33 和功能中起重要作用。33kDa蛋白在8M尿素处理充分解折叠后再用NAI进行修饰， 可使全部8个Tyr都被修饰上，此时33kDa蛋白的荧光光谱和CD光谱发生进一步的变 化，显示33 kDa蛋白的结构更加解折叠，结果表明至少有1个处J二深度包埋的Tyr也参 与了维持蛋白的高级结构。 2．关键的赖氨酸残基参与维持33kDa蛋白的结构和功能 用N．丙酰基琥珀酰亚胺(NSP)对33 kDa蛋白中的Lys进行专一性的修饰。实验 kDa蛋白能较好的重组到PSII膜上，放氧活力也得到 结果表明：O．5mMNSP修饰的33 NSP kDa蛋白结构没有发生明显变化。4mM 恢复。荧光光谱和CD光谱显示修饰的33 kDa蛋白几乎失去重组到PSII膜上的能力，PSII膜的放氧活力也得不到恢复。 修饰的33 mM kDa蛋白结构发生明显变化。酶解结合 荧光光谱和CD光谱显示4 NSP修饰的33 NSP才修饰得到，由此我们认为这些 Lvs76)和Lvsl30(或Lysl37)只有在4mM kDa蛋白的结构和功能至关重要。 Lys残基对维持33 3．NAI修饰对23kDa蛋白结构及其与PSII膜重组能力的影响 用不同浓度乙酰眯唑(NAI)修饰23kDa蛋白的酪氨酸(Tyr)残基。当修饰浓度分 别为5、20、40mM时，酪氨酸残基被修饰的个数依次为l、4、8(实际值为O．78、3．66、