农村饮用水有机提取物致突变性研究.docVIP

农村饮用水有机提取物致突变性研究 了解镇江肿瘤高发村生活用水污染物致突变强度，为判断肿瘤病因提供依据。方法 选取3个肿瘤高发村为观察区， 3个环境相似的村为对照区。应用鼠伤寒沙门菌组氨酸回复突变试验（Ames）试验，测试生活饮用水提取物对鼠伤寒沙门菌的组氨酸营养缺陷型菌株回复突变强度。结果 对照区3个村和观察区的前隍村水样有机提取物在加与不加S9时所设剂量有机提取物诱导的回复突变菌落数都没有超过自发对照的2倍，结果为阴性。观察区的江心洲1号、2号河水有机提取物在加S9与不加S9 时对TA98、TA97试验菌株诱发回复突变的MR值分别为2.71、3.38和2.71、3.00。1号、2号出厂水样有机提取物在加S9时对试验菌株TA98、TA97诱发回复突变的MR值分别为2.18、2.00和2.06、2.00，存在明显剂量-反应关系。研究区的勤丰村1号、2号河水有机提取物在加S9 与不加S9 时对TA98、TA97、TA100试验菌株诱发回复突变的MR值分别为4.30、4.70，2.32、2.44，2.00、2.36和3.39、3.79，2.18、2.29，2.00、2.14。勤丰村1号、2号河水有机提取物在加S9时对TA102试验菌株诱发回复突变的MR值分别为2.07、2.01。勤丰村1号、2号浅井水有机提取物在加S9时对TA98、TA97、TA100试验菌株诱发回复突变的MR值分别为2.03、2.15、2.02和2.03、2.14、2.00，存在剂量反应关系。结论 镇江农村饮用水有机提取物具有致突变性，饮用水有机污染可能是镇江农村肿瘤高发的主要危险因素之一。 国内外大量研究显示：饮用水污染与肿瘤相关，特别是饮水有机污染物与消化道肿瘤的研究较多[1,2]。到目前为止，全世界已在饮水中检测出765种有机化学污染物，其中117种被认为或被怀疑有致癌，致畸和致突变作用；在117种“三致”物中，已有20种被确认为致癌物，23种为可疑致癌物，8种为促癌物，56种为诱变物质[2,3]。20世纪80年代以来，中国经济的快速发展带来了不同程度的环境污染，尤其是区域性水环境恶化导致的城乡居民肿瘤发病率上升的现象引起了学术界的广泛关注[1,4]。江苏镇江所辖的长江中岛屿扬中县，消化道肿瘤标化发病率为265.2/10万，大大高于全国的平均水平76.05/10万[1，4~6]。近10年来，镇江辖区的江心洲、勤丰、前隍村恶性肿瘤发病率持续攀升，当地居民饮用水污染严重， 2009-04/10调查，饮用水中反映有机物污染的综合评价指标CODMn、BOD5、氨氮、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮等均有不同程度超标，同时检出多种农药、重金属等（另文发表）。为给肿瘤病因的推测提供实验依据，2009-06/12，对肿瘤发病率较高的 3个村和3个对照村的饮水有机提取物进行了致突变性研究。 1 对象与方法 1.1 对象 选择镇江肿瘤发病率较高的江心洲、勤丰和前隍3个村为观察对象；以地理环境，民族风俗，生活习惯和经济水平相似的上党村、世业洲和姚桥村3个村为对照。 1.2 采样 在丰水期，选择6个调查村的饮用水和水源水分别采样1份，合计12份，4℃保存，4h内送实验室提取水有机物。 1.3方法 1.3.1 仪器试剂 37oC隔水式恒温培养箱(杭州)、恒温振荡器SHZ-82A（金坛）。二甲基亚砜（国药集团）、敌克松（上海金桥）、2-氨基芴（瑞士Fluka公司）、叠氮钠（美国Sigma公司）、1.8二羟基蒽醌（南通海迪化工）、牛肉膏蛋白胨液（国药集团）、活化系统（江苏大学医技学院毒理室）。 1.3.2 水样有机提取物的制备 取水样250L，应用XAD-2树脂提取水中混合有机物。树脂用前经重蒸甲醇、丙酮、二氯甲烷分别过柱8h。速度为3倍床体积/min。过柱完后依次用3倍体积的二氯甲烷和甲醇洗柱（流速0.1倍床体积/min）。将洗脱液收集到烧杯中，加3g无水硫酸钠脱水2h后，洗脱液经氮气25℃吹干至2ml。DMSO定容至5ml，该溶液代表原水50L/mL。另取树脂，用洗脱液洗脱、氮气25℃吹干、DMSO溶解，作为溶剂对照。所有样品-20℃冰箱保存备用。 1.3.3 试验菌株 选用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100和TA102作为试验菌株（中国疾病控制中心中毒控制所提供），用牛肉膏蛋白胨液体培养基增菌培养，接种后于37℃，100r／min振荡培养12h左右，各菌株过夜培养液细菌浓均≥109个/ml，在加与不加体外代谢活化系统(士S9)的条件下进行试验。 1.3.4 试验方法 应用平板掺入试验法。将0.1ml样液和0.1ml测试菌液加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.5ml S9活化系统，混匀后迅速倾于底层平板，冷凝后置37℃培养箱倒置培养48h观察结果。加与