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基因工程涉及的主要技术 DNA提取的几种方法 总RNA的提取 二、凝胶电泳 常见的凝胶电泳 * 遗传专业 姓名：张红 学号1310170039 导师：张斌 1 DNA和RNA的提取和纯化 2 凝胶电泳 3 分子杂交 4 PCR反应 5 基因文库的构建 一、DNA和RNA的提取和纯化 核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作 。 一般程序 1、供体的核酸分离 供体细胞培养 收集(菌体)细胞 细胞破碎 分离总DNA 分离细胞器 分离总RNA 分离细胞器DNA RNA poly(A)RNA 特异性RNA 染色体DNA(组建基因组文库) cDNA（组建cDNA文库） （1）基因组DNA的提取 CTAB法 SDS法 其它 （2） 非基因组DNA的提取 质粒DNA的提取 碱裂解法 煮沸法 线粒体、叶绿体DNA的提取 差速离心结合SDS裂解法 根据所用蛋白质变性剂种类不一样分为以下三种制备方法： 1）热苯酚抽提法 2）胍盐法：异硫氰酸胍和硫氰酸胍 3）LiCl/尿素法 其中以胍盐法最好，对于从那些RNase含量很高的组织（胰脏）中提取RNA特别有效，可使RNase迅速变性，制备的RNA有较高翻译活性。在RNA制备中，细胞破碎与蛋白质变性是同步进行的。 凝胶电泳的原理： 分离原理-在电场的作用下，DNA分子在琼脂糖凝胶中移动时，有电荷效应和分子筛效应。 检测原理-溴化乙锭（EB）在紫外光照射下能发射荧光，当用EB对DNA样品染色时，加入的EB就插入DNA分子中，荧光强度与DNA含量成正比。 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电点聚焦电泳 *