钙敏感受体对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响与机制.pdf

钙敏感受体对人鼠心肌缺fOt／}fJ：瑾滓损伤的影响及机制 中文摘要 钙敏感受体(CaSR)属G蛋白偶联受体，在维持机体钙离子和其它离子稳态 中起重要作用，同时也参与调节细胞分化、增殖、凋亡、基因表达和激素分泌等。 CaSR在甲状旁腺等组织的功能已有大量研究，但其在心血管系统的生理功能和 病理意义仍不甚清楚。 目的观察大鼠在体心肌缺血再灌注损伤时CaSR的表达变化及与心肌损伤 关系；CaSR在缺氧／复氧诱导新生鼠心肌细胞凋亡中的作用及信号传导途径。 方法(1)采用冠状动脉结扎和松结的方法，复制大鼠在体心肌缺血／再灌 注损伤模型，记录心功能；测定血清LDH、SOD活性和MDA、NO含量，HE染色和 透射电镜观察心肌结构变化： 应用RT—PCR、Westernbtot技术分别测定假手术 组、缺血／再灌注lh、2h、4h、6h时心肌组织中CaSRmRNA的转录和蛋白表达变 化。(2)原代培养乳鼠的心肌细胞，采用95％N。+5％C0，、37℃条件下模拟缺 血培养液培养2小时后，更换为正常DMEM培养液常规培养24小时的方法建立新 生大鼠心肌细胞缺氧／复氧模型。利用MTT比色法、TUNEL染色和流式细胞仪检 测心肌细胞存活率和凋亡率；电镜观察细胞超微结构变化；激光扫描共聚焦显微 镜测定心肌细胞内钙离子([Cg+]。)的变化；Westernblot、免疫荧光、RT-PCR mRNA的转 和原位杂交等方法观察心肌细胞Fas／FasL，caspase-3，-9和Bcl-2 录和蛋白的表达：采用Western 和ERKl／2蛋白的表达。 结果(1)大鼠在体，tl,肌缺血／再灌注损伤时，心功能及SOD活性随再灌注时 间延长而减低，LDH活性和MDA、NO含量在再灌注2h时最高；心肌超微结构损伤在 再灌注lh、2h较重，随再灌注时间延长而减轻；大鼠心肌缺血／再灌注1h、2b心 肌组织CaSR的mRNA和蛋白质表达升高，再灌注4h、6h后降低。(2)模拟缺氧／ 复氧后心肌细胞凋亡增加，心肌细胞超微结构明显损伤；CaSR激动翔]GdCl，进一 阶尔演医科人学博I学位论义 步增加了心肌细胞凋亡，加重了心肌细胞超微结构损伤；使[ca’]．进一步升高， 的[Cr+]．增高；GdCl艘caspase一3，一9，Fas／FasLmRNA转录和蛋白的表达及Cytc 的释放进一步增加，Bcl一2 mRNA的转录和蛋白的表达则进一步下降，同时CaSR 和磷酸化ERKl／2表达上调。 结论(1)在体大鼠心肌缺血／再灌注损伤模型中，CaSRmRNA和蛋白质的 表达在再灌注早期升高，晚期降低；且CaSRmRNA和蛋白质的表达多时，心肌损 伤明显。(2)模拟缺氧／复氧乳鼠心肌细胞模型中，CaSR可通过PLC-IP，通路介导 细胞内钙超载；可通过线粒体途径和细胞表面死亡受体途径介导心肌细胞凋亡； 同时启动MAPK通路使p—ERKI／2蛋白表达上调，抑制凋亡，但其促凋亡作用占主导。 关键词 钙敏感受体缺血／再灌注细胞凋亡 大鼠心肌细胞 钙敏感受体对人鼠心肌缺JNt／阿灌沣损伤的影响及机制 andfunctionof inrat Expression calcium—sensingreceptor in cardiomyocytesischemia-reperfusioninjury Abstract a most G—proteincoupledreceptor．The Calcium—sensingreceptor(CaSR)is to