RSCA技术应用于HLAAB座位高分辨基因分型的研究.pdfVIP

96 005 8 18 4 Chin J Blood T ransfusion, Augu st, 005, Vol. 18, No. 4 RSCA HLAA , B * 邓志辉 吴国光 张 旋 周 丹 高素青( , 518035 ) : 采用参比链介导的构象分析( reference strand mediat ed conformation analysis, RSCA) 技术, 建立新 型可靠的H LAAB 高分辩基因分型方法, 应用于H L A 基因分型及供受 组织配型 采用 一对座位特异 性引物, 扩增H L A A B 基因的第 3 外显子和第 内含子扩增产物与单链标记荧光物质的参比链按 一定比例混 合, 经变性退火反应及脱水处理后, 在杂交产物中掺入分子量内参标准物, 用ABI377 型基因测序仪电泳检测用 ABI GeneScan 3. 1 软件分析每 一泳道内异源双链波峰的迁移值峰高及峰面积值, RSCA H LA Typer1. 3 软件分析 H L A 等位基因型应用本方法, 对第13 届国际组织相容性协作组( IH W) 送检的 0 份盲检样本, 以及 份H L A 等 位基因型已知的质控样本进行了检测 份质控DNA 的检测结果, 与已知的H L A 基因型完全相符; 0 份盲 检样本H LAAB 座位的检测结果, 与IH W 公布的结果完全相同, 准确率达100% RSCA 为新型高分辨水 平的H L A 基因分型方法, 并且出现模棱两可结果的情况少, 分型结果准确可靠 : 参比链介导的构象分析( RSCA) H LAAB 座位 基因分型 高分辨率 + :Q503 R4571 1 Q754 :A : 1004549X( 005) 040 9603 HLA DNA 980bp 50l, RSCA amplification buffer , PCR( PCRSSP) PCR 0l, ddH O . 6l, HLAA 5 3 1l ( PCRSSOP) H LA ( SBT ) ( H L A B : B 5 3 1l) , Taq ( 5U/ l) 0. 4l, DNA ( 100ng/ l) 5l , : 98 ! 0s; 96 ! 0s, 68 ! 90s, 35cycles; 7 ! H L A 5m in; 15 ! ( ref erence strand mediated con 1. 4 RSCA formation analysis, RSCA) H LA 1. 4. 1 H LAA : 6lH L A A , , PCR , RSCATM A H LA DNA ( l) HLAB : 6l H L A B PCR , , RSCAT M B 3 ( l) H L A [ 1~ 3] 00 13 1. 4. 2 RSCA : HLAAB ( IH W) 0 , HLAAB RSCA∀ # : 95 ! 4min; 55 ! 5min; , 15 ! 5m in 1. 5 1 1. 5.