HPLC_方法开发.pdf

安捷伦科技 （中国）有限公司 HPLC AEHPLC AE 李浪 2012年5月；北京亦庄开发区 液相色谱方法开发与优化液相色谱方法开发与优化 液相色谱方法开发与优化液相色谱方法开发与优化 主要内容主要内容 主要内容主要内容 HPLC 基础知识的复习及衡量液相色谱分离的参数 • 理论塔板数，拖尾因子，分离度，重复性 方法开发的基本策略 方法开发的主要调节参数 •• 流动相流动相 • 固定相 • 柱温 • 等度与梯度方法学 主要内容主要内容 主要内容主要内容 HPLC 基础知识的复习及衡量液相色谱分离的参数 • 理论塔板数，拖尾因子，分离度，重复性 方法开发的基本策略 方法开发的主要调节参数 •• 流动相流动相 • 固定相 • 柱温 • 等度与梯度方法学 基本概念与公式 液相色谱的基础理论回顾液相色谱的基础理论回顾 液相色谱的基础理论回顾液相色谱的基础理论回顾 液相色谱原理液相色谱原理 －－ 基本概念及方法开发基本概念及方法开发 液相色谱原理液相色谱原理 －－ 基本概念及方法开发基本概念及方法开发 液相色谱实验所需的基本参数 • 流动相：种类及配比，等度或梯度 • 固定相：色谱柱类型及内径、长度 • 流动相输送系统参数：流速 • 检测器参数 ：紫外检测波长，采样速率等 • 色谱柱的温度控制 • 进样量 以上参数即构成一个具体的 HPLC 方法 ；亦称色谱条件 评价液相色谱方法的标准评价液相色谱方法的标准 评价液相色谱方法的标准评价液相色谱方法的标准 分离度问题 灵敏度问题 重现性问题 峰形问题 ………… 方法开发 ：主要面对什么样的问题，分离度？灵敏度？还是重现性？ 色谱的分离度色谱的分离度 ：：R （分离程度的量度（分离程度的量度）） 色谱的分离度色谱的分离度 ：： s （（分离程度的量度分离程度的量度）） tR2 tR1 ∆t l a n t g 0 i S wR1 t’R2 wR2 Start t’R1 Inject 分离度的公式 ： ( ) t − t 2 t − t R = R2 R1 = R2 R1 ≈ (t − t ) / W s 1 W + W R2 R1 R2 (W + W ) R2 R1 R2 R1 2 影响分离度的因素影响分离度的因素 ：：K’、、α 及及N 影响分离度的因素影响分离度的因素 ：： 、、 及及 分离度方程 ：  k α − 1 N  R =     s kk ++ 11 αα  44 