148.薄层色谱法检验操作规程.docVIP

赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 薄层色谱法检验操作规程 编 码 SOP-ZL-00-148 页 数 2—1 实施日期 制 订 人 审 核 人 批准人 制订日期 审核日期 批准日期 制订部门 质管部 分发部门 质管部 目 的：建立健全薄层色谱法检验操作规程，使操作规程规范化。 适用范围：适用于本公司检品薄层色谱法检验的检测。 责 任：质管部、QA人员。 内 容： 1、引用标准 《中华人民共和国兽药典》（二○○五年版）一部。 2、仪器与材料 2.1.玻璃板 除另有规定外，用10cm×10cm, 10cm×15cm，10cm×20cm或20cm×20cm 的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2.吸附剂或载体 最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、 硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相或载体用水适量调成糊状,均匀涂布于玻璃板上,，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10%～15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基钠水溶液（0.2%～0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。 2.3.点样器 一般采用微升毛细管或微量注射器 2.4.展开室 应使用适合薄层板大小的专用玻璃缸，并有严密的盖子，除另有规定外， 底部应平整、光滑，便于观察。 3、操作方法 3.1.薄层板制备 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研体中向一方向研磨混合， 去除表面的气泡后，倒在玻璃板上，倾斜玻璃板并使其充满整块玻璃板，轻轻振动 使其涂布均匀（厚度为0.2～0.3mm），将涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透 赣州亿圆生物药业有限公司 操作标准----质量管理 文件名称 薄层色谱法检验操作规程 编 码 SOP-ZL-00-148 页 数 2—2 射光和反射光检视）。 3.2.点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，样点直径为2-4mm，点间距离约为1.5～2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3.展开 展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴 二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封缸盖，待展开至规定距离（一般为10～15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时在壁上贴二条 与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡或按正文操作。 3.4.如需用薄层仪对色谱进行扫描供鉴别、检查或含量测定，则可用薄层扫描法。 4、薄层扫描法： 4.1.定义 系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有吸收紫外光或可见光 的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 4.2.除另有规定外，薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采用吸收法，或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与对照品同板点样，展开，扫描，积分和计算。 4.3.用外标法测定时，若对照品各数据在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点 法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。含量测定时， 供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不得少于4个对照 品。 每一浓度不得少于2个，薄层扫描定量用的对照品纯度应符合含量测定用对照品的要求。