表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验的研究.pdf

摘要 摘要 目的 采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损 创面，观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子．11的表达变 化。 方法 (1)取因创伤等原因致意外流产的的妊娠24,26周龄胎儿皮肤标本，用胰蛋 白酶和EDTA联合消化法分离表皮，用Ⅳ型胶原快速粘附法分离纯化人表皮干 细胞，以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成的表皮干细胞培养基 进行体外培养，测定克隆形成率。(2)制备脱细胞真皮将体外培养的人表皮干细 胞接种到脱细胞真皮支架中，构建组织工程人工皮肤。(3)取新西兰白兔常规 制作背部全层皮肤缺损创面随机分为四组，A组用含表皮干细胞的组织工程皮肤 移植于皮肤缺损创面；B组用含角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面； C组用单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面；D组用创面空置为对照。观察创面 修复情况，局部炎症反应，创面愈合时间。各组分别于术后在部分创面取材行 常规HE染色和IL．10、TNF．Q免疫组织化学染色观察。 结果 体外培养的人表皮干细胞增殖稳定，克隆形成率明显高于角质细胞对照组。 制备脱细胞真皮柔软有韧性，HE染色显示已去除表皮，真皮内未见细胞及碎屑 存在，胶原排列规则。表皮干细胞接种于脱细胞真皮后增殖良好，HE染色可见 较多的细胞分布于真皮支架中。含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好， 局部炎症反应轻微，无出血、积脓、坏死，创面愈合时间较角质细胞对照组明 显缩短。IL．10免疫组化染色显示四组均有表达，其中A组表达最强，B组表达 次之，C组和D组表达最弱。TNF．Ⅱ免疫组化染色：四组均有表达，其中B组 表达最强，A组表达次之，C组及D组表达较弱。 结论 以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮 肤缺损创面的修复治疗。 II 摘要 关键词：表皮干细胞；脱细胞真皮；人工皮肤；创面愈合；皮肤移植；n盯．a： IL．10 Abstract Abstract objectives： Toconstructtheartificialskin、)l，im stemcellsandacellulardermal epidermal andto therabbitfullthicknessdermal observetheeffectofwound repair wounds，to andlocalskintissueIL-10andtumornecrosisfactor-Q repair expression． Methods： The24—-26一week-oldfetalskin ofthefetuscamefromtheaccidental sample abortion．Thewas and the sampledisposed谢thTrypsin·EDTAgot epidermis，then had IV Wasusedto the and the cells，the digestedepidermis epidermal typecollagen and thehuman stem factorand isolate cells，the purify epidermal