121蛋白质的分离纯化.pptVIP

基因工程下游技术简介 下游工艺的大体步骤 细胞扩增 细胞破碎 离心分离 （溶解包涵体） 层析分离 （离子交换层析 反相层析 疏水层析 凝胶层析 亲和层析等） 分离纯化的要求 1、纯度：主要取决于研究的目的和应用上的要求。如作为研究蛋白质的一级结构、空间结构，一级结构与功能的关系、工具酶和标准蛋白、酶法分析的酶制剂，都要求均一；工业、医药方面应用的酶和蛋白质制剂，达到一定纯度即可，不要求均一。 2、活性：要求保持天然构象状态，有高度的生物活 性。 3、收率：希望收率越高越好，但在分离纯化过程中总有不少损失。而且提纯步骤越多，损失越大。 细胞破碎方法 1. 机械法： 1) 研磨：将样品置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆。 2) 组织捣碎器：这是一种较剧烈的破碎细胞的方法，通常用10000r/min～20000r/min的内刀式组织捣碎机(即高速分散器)将细胞打碎。 2.物理法： 1) 反复冻融法：将细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或40℃)迅速融化，如此反复冻融多次，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 2) 超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时，时间要长一些。 3) 压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa～2000×105P