蛇床子素纳米粒在小鼠体内抗肿瘤活性.docVIP

第四章 蛇床子素纳米粒在小鼠体内的抗肿瘤活性 本章以H22荷瘤小鼠为肿瘤模型动物，考察蛇床子素纳米粒及其冻干粉在小鼠体内的抗肿瘤活性，包括肿瘤生长、体重抑制、抑瘤率、对免疫器官的影响等，并用生物显微镜观察肿瘤组织的病理学相关性质。 仪器与材料 1.试剂及药品 ； (Poloxamer 188，P188，沈阳药大集琦药业有限责任公司)；无水乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；化学纯CR（国药集团化学试剂有限公司）；其它试剂为分析纯。2.主要仪器 ME2155分析天平德国Starorious公司BD Facscalibur流式细胞仪美国Beeton Dickinson公司85-2A型恒温磁力搅拌器（江苏富华仪器公司）在含有10% 小牛血清的RPMI1640培养液5%CO2，37℃培养箱中培养取对数生长期细胞。清洁级 一、荷瘤小鼠模型建立 H22细胞在37℃、5%CO2培养3d，以无血清RPMI-1640培养液调整细胞浓度为1×107 mL-1，取0.2mL注入小鼠腹腔内。7d后将小鼠颈椎脱臼处死，于75%乙醇浸泡1~2 min后抽取腹水，用生理盐水稀释，吸管充分吹打均匀，1 000 r·min-1离心5 min，倾出上清，加生理盐水稀释成1×107 mL-1的腹水瘤细胞悬液，移入玻璃瓶内，将玻璃瓶放于冰水槽里冰浴。用注射器抽取细胞，每只小鼠右腋皮下接种0.2mL瘤液(2×106个细胞)。 二、给药剂量与方法 将接种后的小鼠随机分为10组，每组10只。用生理盐水做空白组；分别用Ost、Ost-S100-NP、Fd- Ost-S100-NP的低、中、高剂量组为实验组。药物3个剂量组为1.0mg/kg、2.0mg／kg、4.0 mg/kg，每只给药0.2ml/d。腹腔注射给药，每日一次，共给药8d。同时，每日用天平称所有荷瘤小鼠的体重。 三 、观察指标 给药8d后颈椎脱臼处死各组小鼠，完整剥离肿瘤并称重，另取出肝、脾脏、胸腺并分别称重。按式4-1、4-2分别计算抑瘤率(inhibition rate on tumor weight, IRW)、脾指数、胸腺指数，统计体重增长和肝重： (4-1) 脾指数或胸腺指数 /mg·g-1=脾脏或胸腺重量/体重 (4-2) 四、纳米粒在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性 1. 纳米粒对荷瘤小鼠体重的影响 NPs、Fd-Ost-S100-NPs的小鼠体重，可见纳米粒及其冻干纳米粒组对小鼠体重的抑制作用较小，减轻了药物的副作用。这应当与其在体内的肝靶向性分布，减少药物在其它组织和细胞中的分布有关。 表：纳米粒对荷瘤小鼠的作用 Group Dose /mg·kg-1 Number Body weight /g pre post Saline - 10 23.5±2.1 36.2±2.0 Ost 1.0 10 23.4±2.0 32.2±1.5 2.0 10 23.3±1.9 30.8±2.2 4.0 10 23.4±2.5 30.1±2.3 Ost-S100-NPs 1.0 10 23.1±2.2 35.9±1.7 2.0 10 24.0±2.5 33.8±1.5 4.0 10 23.1±1.4 32.4±2.6 Fd-Ost-S100-NPs 1.0 10 23.6±2.4 35.0±1.7 2.0 10 23.6±1.9 32.9±2.1 4.0 10 22.9±2.8 31.2±1.9 2. 纳米粒的抑瘤率 Ost-S100-NPs和Fd-Ost-S100-NPs都可以增强Ost对小鼠肿瘤的抑制作用，反映了其在体内良好的肝靶向分布和抗肿瘤活性。同种剂量情况下，Ost-S100-NPs的抑瘤效果最佳，纳米粒的冻干粉制剂效果次之，原料药作用最低。 表：纳米粒对荷瘤小鼠的作用 Group Dose /mg·kg-1 Number Tumor weight /g IRW /% Saline - 10 0.899±0.254 - Ost 1.0 10 0.793±0.268 11.75 2.0 10 0.734±0.375 18.32 4.0 10 0.656±0.286 27.03 Ost-S100-NPs 1.0 10 0.700±0.292 22.13 2.0 10 0.511±0.175 43.11 4.0 10 0.393±0.208 56.20 Fd-Ost-S100-NPs 1.0 10 0.713±0.258 20.64 2.0 10 0.544±0.179 39.53 4.0 10 0.424±0.225 52.81 3. 脏器指数比较 胸腺和脾脏为体内的主要免疫器官。胸腺为初级淋巴器官