人血清白蛋白—丙酮（乙醇〕体系的荧光光谱及共振散射光谱特性.pdfVIP

维普资讯 第加卷 第 7期 应 用 化 学 V01．2ONo．7 2003年 7月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY July2003 人血清 白蛋白-丙酮 (乙醇)体系的荧光光谱及 共振散射光谱特性 潘宏程 蒋治良’ 袁伟恩 唐国顺 罗杨合 (广西师范大学资源与环境学系 桂林 541004) 摘 要 采用双池法研究了pH=7．4Tris．HC!．丙酮(或乙醇)-HSA体系的荧光光谱及共振散射光谱。实验表 明，丙酮对 lISA在325tam处的荧光产生猝灭效应，其根本原因是丙酮的分子吸收。乙醇使 HSA在325 atlat处 的荧光增强，系由于乙醇破坏了HSA的高级结构 ，．I 残基暴露于’lISA的表面并形成氢键所致。在 pH=4．8 NaAC-HAC缓冲溶液中，丙酮体积分数大于30％或乙醇体积分数大于4o％时，HSA分子 因高级结构被破坏 而互相聚集，导致470nlat处的共振散射急剧增强。 关键词 丙酮，乙醇，人血清白蛋 白，荧光光谱，共振散射光谱 中图分类号：0657．61 文献标识码 ：A 文章编号：1000-0518(2003)07-0660-04 荧光光谱法是研究蛋白质在水溶液中分子构象的一种有效方法，在蛋白质分子构象变化及药物作 用机理等领域研究中得到广泛应用…。共振散射光谱已用于生物大分子的聚集、组装和识别研究 】。 近年来，我们利用共振散射光谱 (ass)技术研究液相纳米微粒和超分子体系的结果表明，共振散射技术 是检验液相体系中是否存在超微粒和界面的重要手段 J。丙酮和乙醇是广泛使用的有机溶剂，它们 可使蛋 白质变性，对蛋 白质功能具有重要的影响。研究丙酮和乙醇对人血清 白蛋 白(HSA)的影响，有利 于了解蛋白质的结构和变性机理，对生命科学和临床医学都有重要意义，但对该体系的共振散射光谱研 究报道较少。本文研究了丙酮对HSA的荧光猝灭效应，乙醇对 HSA的荧光增强效应。采用双液池研究 了丙酮和乙醇的分子吸收对 HSA荧光及pH值和缓冲剂对 HSA光谱的影响。讨论了光谱变化原因和 HSA荧光猝灭和增强机理 。 1 实验部分 ． 1．1 仪器和试剂 RF一540型荧光分光光度计 (日本岛津)，激发狭缝S。=10nna，发射狭缝 s 为 10nna或5nm；RTC一 756型紫外可见分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司)。 2mg／L人血清 白蛋 白溶液 (humanserumalbumin，上海科华．东菱有限公司)；0．05mol／LpH=7．4 Tris-HC1缓冲溶液；0．1mol／LNaAC-HAC缓冲溶液；其余试剂均为市售分析纯，所用水均为二次蒸馏 水 。 1．2 实验方法 A：在 10mL比色管中，依次加入 2mLpH=7．4Tris．HC1缓冲溶液，0．4mL的2mg／L人血清 白蛋 白溶液，一定量的乙醇或丙酮溶液，用二次蒸馏水稀释至 5mL，摇匀，在荧光分光光度计上 ，以A = 270nm激发，纵坐标 (ordinate)为8，记录200—700nIn范围发射光谱。在 ordinate为5，A。=A。条件下 同步扫描获共振散射光谱。用紫外可见分光光度计记录其吸收光谱。 B(双池(doublecel1)实验方法)：按实验方法 A获得 pH=7．4Tris．HC1缓冲溶液一HSA溶液为 a溶 液体系；pH=7．4rids-HC1缓冲溶液-丙酮(或乙醇)溶液为b溶液体系。在荧光分光光度计样品室中，正 2OO2·12-04收稿，20o3-04-o2修回 广西 自然科学基金 (0144003)和广西教育科研基金资助项 目 通讯联系人：蒋治 良，男，1965年生，博士，教授；E-mail：iang@ ．gx．eaiafo．net；研究方向：纳米化学与光谱分析 维普资讯 第 7期 潘宏程等