抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物探针的制备及生物学特性.pdfVIP

V01．30 高等学校化学学报 No．1 OFCHINESE 2009年1月 CHEMICAI．JOURNALUNIVERSITIES 60—63 抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物 探针的制备及生物学特性 李富荣1，乔飞燕2，孔小丽1，周汉新1，齐晖1，任莉莉1 (1．暨南大学第二临床医学院(深圳人民医院)临床医学研究中心，深圳518020； 2．兰州大学化学化工学院，兰州730000) 摘要纳米金通过静电吸附抗体，与寡核苷酸共价结合制备双标记纳米金生物探针，比较了双标记纳米金 生物探针和单标记抗体IgG或ss-DNA的稳定性和反应性．结果表明，在水溶液中纳米金由于ss—DNA的结合 使tsG抗体的吸附能力明显改善，IgG的吸附也影响二硫苏糖醇(DDT)对gs—DNA的解离作用，双标记纳米 粒上覆盖(50士15)条s”DNA和(10 杂交实验证明，纳米金表面标记的lgO和gs—DNA具有良好生物学活性．双标记纳米金生物探针在超微量蛋 白质的检测中具有应用价值． 关键词金纳米粒子；生物探针；寡核苷酸；抗体 中图分类号0629．7 文献标识码A 文章编号0251-079012009】01-0060-04 目前，在早期癌抗原及某些神经肽等极微量抗原榆测上，荧光标记及酶标记技术还缺乏足够的灵 敏性，在一些超微量蛋白，如早期肿瘤抗原和神经肽的检测，同位素的检测灵敏性虽然可达到 1“g／mL，但需要特殊的设备和安全保护，限制了其使用．由于纳米金具有很强的免疫标记能力，可以 和很多基团进行键合，其共轭化合物有很宽的pH稳定性、很高的离子强度以及离子稳定性，为生物学 立了“生物条码核酸芯片检测法”，成功应用于PSA，HCG及AFP等超微量物质的检测，检测下限比传 统的ELISA低6个数量级．目前有关双标记纳米金生物探针制备报道甚少，有关双标记后抗体和DNA 的相互影响及其在应用中活性的保持等尚待研究．本文就双标记纳米金生物探针的制备和生物学特性 进行了探索研究，并对纳米金上抗体和SS—DNA吸附的稳定性进行了探讨． 1实验部分 1．1材料与仪器 胶体金粒径为(10 TAAAAAAAAAA(CH，)≈．SH一3’，互补序列：5 膜(碧云天生物技术研究所)；其它化学试剂均为分析纯；实验用水为灭菌二次水． HS一3垂直混合器(宁波新芝生物科技股份有限公司)；0．22恤m微孔滤膜(北京鼎国生物技术公司)． 1．2金纳米粒子生物探针的制备 1．2．1 mL纳米金 纳米金抗体(IgG—Au)的标记将金纳米粒子用0．22“m的微孔滤膜进行过滤．取5 粒子溶液，用K：c03调pH值为9，加入25峭羊抗兔IgG，摇匀5rain后，迅速加入250灿质量分数 收稿日期：2008-04-23． 基金项目：国家‘‘八六三”计划项目(批准号：2003BA310A2,3)和深圳市科技局计划项目(批准号：201MBll0)资助．’ 联系人简介；李富荣，男，博士，研究员，博士生导师，主要从事医用纳米技术研究．E—mail：fdi62@yahoo．COIn 万方数据万方数据 李富荣等：抗体和寡核苷酸双标记纳米金生物探针的制备及生物学特性 6l 为l％的聚乙二醇(PEG)溶液，在常温下放置2～3h，在4℃低温下离心30 rain，吸去上清液，在沉淀 5mL 0．05％的PEG(pH=7．0的PBS和0．05％的叠氮钠)溶液，于4℃下冷藏保存备用． 1．2．2纳米金单链寡核苷酸(Au·DNA)标记将5．5 mg硫醇荧光团标记的ss—DNA与5mL纳米金混 mL0．2mol／L