chap9.3糖链的合成进展.pptVIP

第九章 糖链研究方法 §9.1 糖组分分离方法 §9.2 糖链结构分析方法 第九章 糖链研究方法 §9.3 化学法和酶法合成聚糖 寡糖化学合成的复杂性 DNA和肽链合成：所需的天然保护的核苷和氨基酸以及试剂、溶剂、仪器都已商品化 寡糖化学合成需要精巧的羟基保护策略 需要糖基化立体特异性方法合成正确异头体 Synthetic protocol for a hypothetical Glc1-4Glc disaccharide 酶法合成寡糖 不需要保护基 底物结构专一性 产物具有立体特异性 用于糖生物合成的三类酶 糖苷酶 glycosidase 糖苷合成酶 glycosynthase： one kind of mutant glycosidases 糖基转移酶 glycosyltransferase Glycosidases Donor: glycosyl fluorides 2-NP-glycoside 4-NP-glycoside Advantage Enzyme: abundance， exist in all living organisms Substrates: relatively inexpensive Disadvantage a low yield (10-40%） a relative long reaction time amount of enzyme, substrate Mechanism of glycosidases 糖苷酶介导的寡糖合成 从便宜的糖苷中转移一个单糖 有些酶会得到键位异构体的混合物 Glycosyltransferanses (GTs) Mechanism of GTs 糖基转移酶介导的寡糖合成 将单糖残基从其活化形式——糖核苷酸转移到延长中的糖链上 需要糖核苷酸底物 需要一定的酶添加顺序 生成的核苷酸需降解以供循环利用 糖核苷酸和酶仍然价格昂贵，可制备毫克级产物 精巧的酶再生系统 糖生物合成中的糖基供体—糖核苷酸 Synthesis of a simple sialyloligosaccharide using in situ regeneration of CMP-NeuAc 复合多糖的大规模化学酶促合成 重组糖基转移酶 相对廉价的前体 对最昂贵试剂——糖核苷酸从游离单糖和磷酸烯醇丙酮酸原位再生，并循环反应 产量高达1kg Glycosynthases Carbohydrate-active enzymes database More than 100 glycoside hydrolases families 3-D structure of glycosidases Site-derected mutagenesis Detailed enzymatic characterization of the mutant 1998, Withers et al Glycosynthase: one kind of mutant glycosidases a high yield: 80% Glycosynthases 糖苷合成酶是糖苷酶的亲核体氨基酸突变酶,催化寡糖的高效合成,可应用于寡糖的大规模生产.最近,糖苷合成酶被成功地应用于两类重要的生物分子--糖蛋白和鞘糖脂的高效合成,这必将对糖生物学和制药业的发展起到重要的推动作用. 将糖苷酶催化中心亲核体氨基酸定点突变为非亲核体氨基酸（如Glu→Ala） ，导致酶原有的水解活性丧失，只催化糖苷键合成反应。 提供额外的亲核试剂，如甲酸钠, 叠氮钠 活化的糖基供体 氟代糖 酶法合成寡糖的发展 翁启惠研究组 John Thorson研究组 Stephen G. Withers 王鹏研究组 翁启惠(Chi-Huey Wong) 中央研究院院长 美国国家科学院华裔院士 The Scripps Research Institute 寡糖的合成 首先用酶法合成了Sia-Lex (Chem Rev,1998,98, 833-862)，当时该四糖的推算价格为20亿美元/千克，他发明的酶法合成使价格降低了3～4个数量级，现已由Cytel Corporation (San. Diego, California)生产。 Programmed one-pot sequential glycosylation (Chem Rev, 2000,100,4465-4493) 糖芯片 Professor Jon Thorson School of Pharmacy Madison,The University of Wisconsin-Madison Glycorandomization and antib