玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究.pdfVIP

ofAnhui 安徽农业科学。Journal Agri．Sci．2014，42(12)：3479—3482 责任编辑石金友责任校对李岩 玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究 8 赵苏州1”，卢运明3，张占路3，赵杨敏3，王磊1，2(1．西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳621010；2．中国农业科学 院生物技术研究所，北京100081；3．深圳农科集团，广东深圳518040) 摘要[目的]优化玉米和拟南芥原生质体的制备条件及瞬时表达体系。[方法]以不同时期玉米叶片和拟南芥为材料分离原生质体， 通过对不同酶浓度，解离时间和渗透压的研究，优化最佳分离原生质体体系；原生质体再经PEG介导的转化，通过GFP基因表达百分比 鉴定原生质体活性和转化效率。[结果]玉米和拟南芥原生质分离的最佳条件为：纤维素酶1．5％，离析酶0．5％；拟南芥酶解4h，甘露 醇浓度0．4mol／L；玉米酶解6h，甘露醇浓度O．45～0．50mol／L。最佳生长时期为：拟南芥6～8片叶；玉米二片叶。用去内毒素质粒经 荧光。[结论]玉米和拟南芥原生质体的制备受酶浓度，解离时间和渗透压的影响，在原生质体转化过程中，质粒DNA纯度，PEG浓度等 是影响转化效率的关键因素，与拟南芥原生质体相比玉米原生质体要稳定性差一些。 关键词玉米；原生质体；拟南芥 文献标识码A 文章编号0517—6611(2014)12—03479一04 中图分类号$513；Q819 in and andTransient Maize Preparation ExpressionSystem Arabidopsis Protoplast Leietal ofLifeScienceand ofScienceand ZHAoSu-zhou，WANG(School Engineering，SouthwestUniversity Sichuan Research of 621010；BiotechnologyInstitute，ChineseAcademyAgTiculturalSciences，Beijing100081) the conditionsofmaizeand andtransient Abstract[Objective]Tooptimizepreparation Arabidopsisprotoplasts expressionsystem．[Meth— and leavesatdifferent wereusedtodissociate od】MaizeArabidopsis developmentperiods protoplasts，theenzyme timeandosmotic were and GFP tOidentify andtransformationeffi— pressureinvestigatedoptimizedusing expressionsystem protoplastactivity bestconditionsfor isolationwerethat1．5％cellulase and0．4mol／L ciency．『Result]The protoplasts enzyme，0．5％macerozymemannitol。 for4hoursfor mol／L for6hoursformaize．Thebest were6—8 digested Arabidopsis：0．45—0．50mannitol，digested developmentperiods